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目的: 在全世界范围内,结直肠癌(CRC)是癌症相关性死亡的第二位常见原因。肿瘤的复发和转移是导致死亡的最主要的原因。在过去十年中越来越多的证据已经表明,在结直肠癌(CRC)中上皮间质转化(EMT)的异常活化有助于肿瘤的进展和转移。在本研究中,我们用免疫组织化学的方法检测了ILEI和EMT相关标记物(E-钙粘蛋白,波形蛋白)在大肠癌组织中的表达情况,并且进一步分析ILEI表达形式与临床病理特征、预后和EMT的关系。 材料与方法: 一、临床病例资料 收集2003年1月到2005年12月在中国医科大学第一附属医院肿瘤外科行结直肠癌根治性手术的194名结直肠癌患者的术后病理标本及相关病理资料。 纳入患者均符合以下条件:1)所有患者均行结直肠癌根治性手术;2)所有切除标本均经病理学检验;3)患者的临床病理和随访资料完整。 TNM分期标准以2010年第七版美国癌症联合委员会颁布的TNM分期标准为准。所有病人的术后状况均通过电话或调查问卷进行随访,随访期在1.5到71个月之间,中位数为52个月。 二、实验方法 免疫组织化学染色采用SP法。FAM3C兔抗人多克隆抗体[ab72182],E-钙粘蛋白小鼠抗人单克隆抗体[HECD-1],和波形蛋白兔抗人单克隆抗体[EPR3776]均购自Abcam(Cambridge,UK)公司。相同标本以PBS代替一抗作为阴性对照。免疫组化染色组织切片由两名不了解临床和病理资料的病理医生独立评分。免疫组化染色结果采用双评分半定量法进行评分,判定标准如下:染色强度(0,未着色;1,淡黄色;2,浅褐色;3,深褐色),阳性细胞率(0,≤5%;1,6-25%;2,26-50%;3,51-75%;4,76-100%).强度评分和百分比评分相乘得到免疫反应评分。如果两位病理医生的免疫反应评分存在差异,将重新评分直到达到一致。根据文献我们用受试者工作特征(ROC)曲线分析来选择cutoff值,进行分组分析。根据以前文献的方法,在光镜下观察十个视野中肿瘤细胞质波形蛋白的染色数量,当>10%的肿瘤细胞呈细胞质染色时为阳性,当≤10%的肿瘤细胞呈细胞质染色时为阴性。 三、统计分析 所有数据均应用SPSS统计软件(version17.0; SPSS for Windows,Chicago,IL,USA)进行分析。ILEI的表达与结直肠癌临床病理因素和EMT标志物之间的关系应用卡方检验方法,与预后结果的分析采用Kaplan-Meier和Cox回归方法。双侧P<0.05认为具有显著差异。 结果: ILEI细胞质的过表达通常伴随着E-cadherin膜表达的下调和波形蛋白的阳性表达。相反的,ILEI细胞质表达的下调,同时伴有E-cadherin的过表达和波形蛋白的阴性表达。ILEI细胞质的过表达与T分期、N分期、TNM分期和EMT表型显著相关(P=0.024,<0.001,<0.001和<0.001,分别),而与肿瘤大小和组织分化无关。此外,ILEI过度表达与癌结节(P=0.002),波形蛋白阳性表达(P<0.001)和EMT表型(P<0.001)显著相关。多因素分析显示,ILEI表达是患者生存的独立预后因素。E-cadherin膜表达与肿瘤浸润深度(pT分期,P=0.009)和组织分化程度(P=0.024)显著相关。波形蛋白阳性表达与淋巴结转移(pN分期,P=0.042),TNM分期(P=0.024)显著相关。生存分析显示,波形蛋白阳性表达与不良预后显著相关(P=0.026)。 结论: 我们的研究结果表明,细胞质ILEI表达是结直肠癌上皮间质转化(EMT)、肿瘤进展及不良预后的一个潜在的标志物。