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绿萍为满江红科(Azollaceae)植物绿萍(又称满江红)Azolla imbricata(Roxb.)Nakai的干燥全草,具有发汗、祛风和透疹等功效。绿萍现有的药材标准缺乏化学成分的含量测定,化学成分及其活性的研究基础亦相当薄弱。因此,本文研究绿萍的主要活性成分,并对这些成分进行定量分析,为绿萍质量标准的提高提供依据。 对绿萍中的化学成分进行分离和鉴定。采用C18、凝胶、MCI等色谱分离技术,从绿萍中共分离得到8个化合物。经NMR和MS等方法分别鉴定为:5-O-咖啡酰基奎宁酸(1)、3,4-O-二咖啡酰基奎宁酸(2)、3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸(3)、4,5-O-二咖啡酰基奎宁酸(4)、3,4,5-O-三咖啡酰基奎宁酸(5)、4,5-O-二咖啡酰奎宁酸乙酯(6)、kaempferol-3-O-(6”-O-caffeoyl)-β-D-glucopyranoside(7)、(-)-N-caffeoyl-L-tyrosine ethylester(8)。其中,化合物2~8首次从绿萍中分离得到,化合物6和8可能是人工产物。 对绿萍提取物进行抗氧化活性成分筛选并测定其中主要抗氧化活性成分的IC50。DPPH-HPLC法的筛选结果表明,化合物1~5为绿萍的主要抗氧化活性成分。采用DPPH法测定化合物的体外抗氧化能力,化合物1~5的IC50值范围在9.20±0.13~14.26±0.28μg/mL之间,表明均具有良好的抗氧化活性。 以绿萍中的5个主要抗氧化活性成分作为指标建立定量分析方法。建立了基质固相萃取法(MSPD)作为样品前处理方法,以壳聚糖为分散剂,甲醇-0.2 M硫酸水溶液(70∶30,v/v)为洗脱溶剂。建立了HPLC-PDA测定5种成分的含量,采用Promosil C18(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,以0.1%甲酸水溶液-乙腈为流动相进行梯度洗脱,流速1.0 ml/min,柱温35℃,检测波长325 nm。MSPD-HPLC-PDA法简便、高效,专属性、准确度、精密度和重复性等效能指标均符合分析方法的要求,适用于绿萍药材的质量评价。