氧化苦参碱对裸鼠皮下移植性胃癌抑制作用及机制的实验研究

来源 :河南中医学院 河南中医药大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:lklolp000
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目的: 本题目主要研究氧化苦参碱对人胃癌MGC-803细胞裸鼠皮下移植瘤生长的抑制作用,并初步探讨其在裸鼠体内抗肿瘤作用的机制,为临床运用氧化苦参碱治疗胃癌提供一定的理论依据。 材料与方法: 1.人胃癌MGC-803细胞由郑州大学公共卫生学院王凯娟教授馈赠;BALB/cA-nu鼠购自中国药品生物制品检定所实验动物中心,合格证编号:SCXK(京)2005-0004;氧化苦参碱为北京显通时代医药科技发展有限公司产品。 2.调整人胃癌MGC-803细胞浓度为1×107/ml,以0.2ml/只注射于每只裸鼠右侧腋窝皮下,复制人胃癌MGC-803细胞裸鼠皮下移植瘤模型。 3.选取裸鼠移植瘤体积达到100-300mm3的裸鼠进行实验,将裸鼠随机分为5组:阴性对照组(NS)、阳性对照组(5-FU)、氧化苦参碱小、中、大剂量组(oxymatrine,OXY),每组不少于6只。每日一次按公斤体重给药,分别腹腔注射等体积的NS、5-FU 50mg/kg、OXY 64mg/kg、OXY 128mg/kg、OXY 256mg/kg。观察裸鼠移植瘤的生长情况,绘制其生长曲线图,计算OXY对裸鼠移植瘤体积的平均抑制率(inhibition rate,LR%),共观察25天。 4.实验结束时,脱颈椎处死裸鼠,剥离裸鼠移植瘤,分为三份:一份用中性福尔马林固定,病理切片HE染色,光学显微镜下观察OXY对裸鼠移植瘤病理形态学改变的影响,并做脱氧核糖核酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(TDT-mediated dUTP nick end labelling,TUNEL)染色来检测裸鼠移植瘤细胞的凋亡,计算其凋亡指数(apoptosis index,AI);一份用Carnoy氏液固定,病理切片Feulgen染色,光学显微镜下观察OXY对裸鼠移植瘤细胞增殖情况的影响:一份用70%酒精固定,用于流式细胞仪检测裸鼠移植瘤细胞Bcl-2和Bax的表达。 结果: 1.裸鼠皮下移植瘤生长动力学研究结果显示:OXY具有抑制人胃癌MGC-803细胞裸鼠皮下移植瘤生长的作用。至实验结束时,OXY小、中、大剂量组裸鼠移植瘤平均体积分别为851.41±287.30mm3,683.48±284.77 mm3,450.80±166.70 mm3,与阴性对照组比较差异均具有统计学意义(P<0.05);OXY小、中、大剂量对裸鼠移植瘤体积的平均抑制率分别为29.75%、36.50%、43.20%。 2.裸鼠皮下移植瘤病理形态学观察结果:光学显微镜下见OXY小、中、大剂量组裸鼠移植瘤细胞均发生不同程度的坏死,以大剂量组最为明显,高倍镜下见为红染的无结构物质。 3.裸鼠皮下移植瘤细胞Feulgen染色结果:光学显微镜下见OXY小、中、大剂量组裸鼠移植瘤细胞核均较阴性对照组的小、数目少、染色淡。 4.裸鼠皮下移植瘤细胞凋亡的检测结果:病理切片TUNEL染色光学显微镜下见OXY中、大剂量组均有明显的裸鼠移植瘤细胞凋亡,其AI分别为18.29±3.70和12.09±2.36,与阴性对照组比较差异均具有显著的统计学意义(P<0.01)。而OXY小剂量组与阴性对照组比较差异则无统计学意义(P>0.05);流式细胞仪检测结果显示:OXY小、中、大剂量组裸鼠移植瘤细胞Bcl-2的表达均较阴性对照组降低,而Bax的表达则升高。经统计学处理,与阴性对照组相比,OXY小剂量组裸鼠移植瘤细胞Bcl-2的表达差异无统计学意义(P>0.05),而Bax的表达差异则具有统计学意义(P=0.017<0.05);OXY中、大剂量组裸鼠移植瘤细胞Bcl-2的表达差异具有统计学意义(P=0.012<0.05),而其Bax的表达差异则具有显著的统计学意义(P=0.003,0.002<0.01)。 结论: 1.氧化苦参碱可以抑制人胃癌MGC-803细胞裸鼠皮下移植瘤的生长。 2.氧化苦参碱抑制人胃癌MGC-803细胞裸鼠皮下移植瘤生长的作用,主要表现在促进移植瘤细胞凋亡、抑制其增殖和对其直接杀伤三个方面。 3.氧化苦参碱促进人胃癌MGC-803细胞裸鼠皮下移植瘤细胞凋亡的机制为下调细胞凋亡抑制基因Bcl-2的表达,上调细胞凋亡活性基因Bax的表达。 4.为临床运用氧化苦参碱治疗胃癌提供了一定的理论依据。
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