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肌肉生长抑制激素（myostatin，MSTN）是骨骼肌的负调控因子，是影响肌肉生长与发育的重要因素。为了促进猪生长后期肌肉的快速增长，就需要消除MSTN对肌肉的负调控作用。本研究通过基因工程的手段，从狮头鹅大腿肌肉中获得MSTN作为免疫原，并采用不同的免疫佐剂，制备了肌肉生长抑制激素的基因工程疫苗，对生长肥育猪进行主动免疫，使猪产生抗MSTN抗体，以颉颃体内产生的肌肉生长抑制激素，促进猪肌肉的生长，并分别比较以油乳剂和脂质体为免疫佐剂的两种疫苗免疫效果。 1．狮头鹅肌肉生长抑制素基因成熟肽的克隆及其在大肠杆菌中的表达 根据扩增的狮头鹅的MSTN基因cDNA全长序列以及成熟肽序列，设计一对引物，并分别在两引物前设计2个酶切位点BamH Ⅰ和Sac Ⅰ，亚克隆狮头鹅肌肉生长抑制激素的成熟肽蛋白编码基因，然后将特异性片段连接到pMD18-T载体，经酶切、PCR鉴定后，构建了狮头鹅原核单纯表达载体pRSETA-MSTN-m，经测序鉴定表明所克隆的MSTN成熟肽基因与Genebank上发表的鸡（AF019621）、猪（AY208121）和家鹅（AF440862）的MSTN-m核苷酸序列同源性分别可达到92％、88％、99％。而翻译后的成熟蛋白氨基酸序列与鸡、猪和家鹅的同源性可以分别达到100％、100％及99.1％，通过IPTG诱导表达重组MSTN-m成熟蛋白，经SDS-PAGE电泳分析，原核表达产物为18.5KD的重组蛋白，为下一步制作促进猪肌肉生长的基因工程疫苗奠定了基础。 2．MSTN重组蛋白的变、复性研究及Western-blotting试验 在重组MSTN-m获得表达的基础上，收集诱导表达4h的大肠杆菌BL21（DE3）菌液，用高浓度的尿素液裂解及溶解包涵体，经SDS-PAGE电泳显示，上清中有大量的表达的目的蛋白，然后经过Ni2+-NTA Resin对带有6个组氨酸标签的目的蛋白纯化，SDS-PAGE电泳显示纯化效果比较理想。随后进行了Western-blotting试验鉴定，证实所表达蛋白即为MSTN成熟肽蛋白，并具有免疫原性。 3．岭南黄鸡肌肉生长抑制素基因成熟肽的克隆及其真核表达载体的构建 根据Genebank上登录的鸡的MSTN基因cDNA全长序列以及成熟肽序列设计一对引物，并分别在两引物前设计2个酶切位点EcoR Ⅰ和Kpn Ⅰ，亚克隆岭南黄鸡肌肉生长抑制激素的成熟肽蛋白编码基因，然后将特异性片段连接到pMD18-T载体，经酶切、PCR鉴定，构建了岭南黄鸡真核单纯表达载体pPICZαA-MSTN-m。经测序