目的:通过构建pBud-EGFP-TRAIL质粒,在体内外观察可溶性人TRAIL蛋白(sTRAIL)对人低分化胃癌细胞株BGC-823的作用。方法:以EFGP为报告基因,sTRAIL为目的基因,构建pBud-EGFP-TRAIL重组质粒,并通过酶切和测序对重组体进行鉴定。经脂质体转染法转染体外培养的胃癌细胞BGC-823,RT-PCR及Western blot检测sTRAIL mRNA及其蛋白的表达,用荧光显微镜观察EGFP的表达,MTT法检测转染后对胃癌细胞的生长抑制率,TUNEL法观察细胞的凋亡情况,流式细胞仪分析转染后胃癌细胞的凋亡率。然后,将重组质粒pBud-EGFP-TRAIL注入胃癌细胞BGC-823裸鼠皮下移植瘤内,通过比较肿瘤体积及H.E染色观察肿瘤组织病理变化,TUNEL染色检测细胞凋亡情况,研究其在体内环境下对肿瘤细胞生长的影响。结果:测序结果证实pBud-EGFP-TRAIL载体构建成功,质粒经脂质体转染后,通过表达sTRAIL蛋白对胃癌细胞发挥作用。MTT法显示转染该质粒的细胞的生长抑制率明显高于对照组,TUNEL法显示细胞核固缩,核染色质聚集或断裂,形成凋亡小体。流式细胞仪结果表明转染该质粒的细胞的的凋亡率明显高于对照组。体内实验表明,注射pBud-EGFP-TRAIL质粒的裸鼠移植瘤体积明显小于对照组,肿瘤组织切片H.E染色可见核大量破碎、溶解,肿瘤细胞大量死亡,并出现大量纤维化结构包裹肿瘤组织,TUNEL染色显示pBud-EGFP-TRAIL组有较多细胞凋亡,而对照组无此明显变化。结论:在体内外初步证实sTRAIL的重组真核表达质粒pBud-EGFP-TRAIL能诱导胃癌细胞BGC-823凋亡,为进一步开展胃癌的基因治疗奠定了基础。