[目的]　　 1、构建EGFP原核表达载体及其在大肠杆菌的表达。　　 2、基于曲线拟合方法定量EGFP在大肠杆菌的表达量。　　 3、基于EGFP表达的大肠杆菌体外抗菌实验。　　 4、基于EGFP的大肠杆菌构建急性尿路感染模型。　　 [方法]　　 1以pEGFP-N1为模板，扩增出750bp的EGFP基因片段，克隆到pET-20b(+)载体上，构建pET-20b(+)-EGFP并转入宿主DE3，PCR鉴定， IPTG诱导后SDS-PAGE分析和荧光分光度计扫描。　　 2 EGFP-E.coli在指定时间诱导表达后用荧光分光光度计和酶标仪分别测得荧光强度和OD600的数据，并用Origin8.0拟合两者关系。　　 3倍比稀释法测定EGFP-E.coli抗菌药庆大霉素、盐酸左氧氟沙星、阿奇霉素的MIC;荧光分光光度计分别测定3种同样的抗菌24h作用的EGFP-E.coli荧光强度，用非线性方程拟合，并评价拟合度;中性粒细胞与EGFP-E.coli共培养后，测定指定时间下的荧光强度，并线性拟合中性粒细胞抗菌的动力学方程。　　 4实验组EGFP-E.coli、空白组PBS和对照组E.coli3组经尿道口导入雌性SD大鼠的膀胱内，3天后尿检、HE染色和荧光拍照对比尿路感染模型。　　 [结果]　　 1成功构建了重组质粒pET-20b(+)-EGFP和DE3稳定表达增强型绿色荧光蛋白。　　 2在IPTG诱导一定时间的EGFP-E.coli，其细菌数与荧光强度具有良好的线性关系。　　 3倍比稀释法测定3种抗菌药对EGFP-E.coli的MIC，和EGFP-E.coli荧光曲线表明抗菌药物抑菌拟合度良好，并且基于EGFP改进了传统中研究PMN抑菌作用。　　 4采用EGFP-E.coli建立急性尿路感染模型部分符合膀胱炎模型特征。　　 [结论]　　 1原核表达载体pET-20b(+)-EGFP的构建及其在DE3稳定表达增强型绿色荧光蛋白都为后面基于EGFP的体外抗菌实验和尿路感染实验提供基础。　　 2定量细菌数与荧光强度的线性关系。　　 3 EGFP-E.coli的荧光曲线表明抗菌药物抑菌拟合度良好，并且基于EGFP研究PMN抑菌动力学作用简单快捷。　　 4提供一种建立急性细菌性尿路感染模型新方法，和可视化细菌观察细菌的侵染过程。