珍稀药用植物明党参种质资源保护及快速繁殖研究

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明党参Changium smyrnioides Wolff是我国特有的伞形科(Umbelliferae)明党参属(Changium)的单种属植物,分布在亚热带的长江流域,我国华东地区的浙、皖、苏、鄂等省的局部地区,为我国著名的特产药材之一。江苏句容栽培明党参以条形色泽俱佳而倍受青睐。但由于人类挖掘和生境的破坏,其分布区和个体数量正日益减少,近些年来其种群呈现明显衰退倾向,1984年被列入国家三级濒危保护植物。鉴于明党参现状,为切实有效地保护野生明党参资源,促进江苏省优良种质资源的保存,为临床提供优质商品,进一步为明党参资源保护、生产和再利用提供新的思路与方法,我们开展了以下研究。(1)明党参品种资源调查和生物学特性的研究。本论文从资源分布状况、生物学特性、抗性研究、性状鉴别、显微鉴别等方面对明党参进行了考察,针对明党参资源日益濒危的现状,提出了保护明党参种质资源的具体措施。(2)明党参生态适宜性研究。通过对明党参生态调查,发现其生长对生境的要求较高,垂直分布于海拔50~350m的丘陵山地,适宜的生境为常绿落叶阔叶混交林,多生长在排水较好的石灰岩山坡上,坡度一般在10~40°;土壤结构、土壤酸碱度、有机质的含量方面分析发现适宜生长的土壤为石灰岩发育的石灰土壤、黄棕壤及砂壤土,pH值6.0~6.5,对N,P,K肥的需求不同;不同产地明党参药材及土壤微量元素分析结果表明药材中微量元素的累积与土壤有着密切的关系,明党参根中K的平均含量是Na的28倍之多,说明明党参是一味高钾低钠的食物中药;10个产地的重金属含量均符合要求;对明党参药材中无机元素的相关性分析显示,毒性元素砷对必需元素铬、铁的吸收有直接或间接的协同作用;微量元素图谱显示,锂、硼、铝、钛、锰、铁、镍、锌、锶、钡为明党参根的特征性元素。(3)明党参细胞组织培养研究,初步建立了明党参的快速繁殖系。以叶柄和叶片为外植体,在MS培养基上添加不同的激素配比进行培养。结果:叶片适宜诱导愈伤组织的激素组合是2,4-D4.0 mg·L-1+Kt0.4 mg·L-1;叶柄诱导出愈伤组织较少;对于芽的增殖,较适宜的激素组合是6-BA2.0mg·L-1+IBAmg·L-1或6-BA3.0 mg·L-1+IBA0.2mg·L-1;而根的诱导则在MS+IAA0.5 mg·L-1或MS+NAA0.5 mg·L-1培养基上进行最好。(4)明党参种质保存研究。试管苗在添加有蔗糖0.3mol·L-1的改良MS培养基(KNO3和NH4NO3减半)上,于低温6±1℃下锻炼3周后,切取茎尖1.5~2.0 mm在含0.1、0.3和0.5 mol·L-1蔗糖的改良MS培养基上预培养1d,室温(22℃)下装载液(2 mol·L-1甘油+0.4 mol·L-1蔗糖)过渡20min,0℃下玻璃化保护液PVS2(30%甘油+15%乙二醇+15%二甲基亚砜+0.4 mg·L-1蔗糖)处理60 min,换成新鲜的玻璃化液后投入液氮保存1d,35±1℃水浴化冻2min,含蔗糖1.2 mol·L-1的改良培养基洗涤20min,接种于MS+6-BA2.0+NAA0.2+GA32.5再生培养基中,暗培养1周后转到正常光下,再生率超过30%。(5)明党参HPLC指纹图谱分析。采用HPLC法比较了不同产地明党参图谱间的差异,建立了明党参的HPLC指纹图谱,并通过指纹图谱相似度计算软件建立了明党参指纹图谱的共有模式,对收集到的样品进行了相似度比较,不同产地来源的明党参药材HPLC峰的相似度不同,表明其内在质量与产地因素密切相关。
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