菌株HD-NK413抗菌物质的纯化及抗马铃薯早疫病机理研究

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马铃薯是世界上继水稻、小麦和玉米之后的第四大粮食作物,但近年来马铃薯早疫病发生频繁,造成相当大的危害。小白链霉菌菌株HD-NK413对马铃薯早疫病菌具有较好的抗菌活性,本试验主要对该菌产生的抗菌物质进行初步分离,并研究其对马铃薯早疫病菌的抗菌机理。用薄层层析法分析发酵液中的有效成分,通过活性炭吸附、硅胶柱层析的方法对HD-NK413的发酵液中的活性组分进行了分离纯化。确定了活性炭吸附的最佳条件为静态吸附12h,pH值自然,活性炭颗粒用量与发酵液体积比为1:1;采用4倍于活性炭体积的pH6的50%丙酮溶液对吸附有抗菌活性物质的活性炭进行洗脱,得到的洗脱液的抗菌活性最高。对50%丙酮洗脱液浓缩后,进行了硅胶柱层析分离,得到了3个分离峰,其中两个是具有抑菌活性的单一组分,在GF254硅胶板上的迁移率分别为0.83、0.86,分别在272和271nm处有紫外吸收峰,符合核苷类抗生素的紫外吸收特征。利用分离到的HD-NK413抗生素粗品研究了对马铃薯早疫病菌的抗菌机制,明确了其对病原菌菌丝体的抑制作用和杀死作用。菌丝生长抑制试验结果表明,抗生素粗品处理的病菌菌丝末端出现了膨胀泡,生长畸形,菌丝多较为短小,菌丝隔膜模糊不清,甚至消失。菌丝杀死试验结果表明,用抗生素粗品处理正常生长的菌丝20h后,多数菌丝体消融,余下的少数菌丝的细胞壁也变得模糊,原生质皱缩,细胞结构受到了严重破坏。对抗生素粗品处理的病原菌菌丝体的生理指标测定结果表明,该抗生素能够增大病菌细胞膜的渗透性导致原生质体渗漏;能抑制病菌细胞壁中麦角甾醇的合成;能使病菌细胞膜产生脂质过氧化作用而破坏其细胞膜的功能;能打破病菌细胞中保护性酶系(SOD、CAT和POD)原有的平衡,使细胞受到氧自由基的毒害、细胞膜脂质过氧化的程度不断加深,最终使菌体受到严重的破坏。
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