论文部分内容阅读
前列腺素类化合物是生理活性物质,参与多种生殖相关活性物质的分泌等。前列腺素类化合物中,PGE2和PGF2α两种在生殖生理方面具有重要作用。PGE2和PGF2α在输卵管内的合成、分泌、分布及参与调节早期胚胎发育的可能性显示了二者在输卵管中是重要的生殖调节因子。本研究以奶牛输卵管上皮细胞为研究对象,探讨了PGE2和PGF2α对奶牛输卵管上皮细胞表达输卵管蛋白的调控作用,具体研究内容如下:（1）EP2和FP受体激动剂对奶牛输卵管上皮细胞表达输卵管蛋白的影响研究。采用RT-PCR和Westernblot法检测EP2受体激动剂butaprost和FP受体激动剂fluprostenol对奶牛输卵管上皮细胞输卵管蛋白表达的影响。结果显示butaprost在4 h、8 h可以显著和极显著促进奶牛输卵管上皮细胞输卵管蛋白mRNA的表达,在4 h、8 h、16 h、24 h显著促进输卵管蛋白的表达;吲哚美辛预处理后,输卵管蛋白的表达有所下降。但是fluprostenol在各个时间点均抑制奶牛输卵管上皮细胞输卵管蛋白的表达;加入吲哚美辛后,输卵管蛋白的表达与fluprostenol组没有显著差异。（2）雌激素与EP2和FP受体激动剂对奶牛输卵管上皮细胞表达输卵管蛋白的影响研究。采用RT-PCR和Westernblot法检测butaprost和fluprostenol与雌激素共同作用对奶牛输卵管上皮细胞输卵管蛋白表达的影响。结果显示,雌激素可以促进输卵管蛋白的表达;雌激素和butaprost联合作用时奶牛输卵管上皮细胞输卵管蛋白的表达量均高于二者单独作用时奶牛输卵管上皮细胞输卵管蛋白的表达量。但是雌激素和fluprostenol联合作用时奶牛输卵管上皮细胞输卵管蛋白的表达量高于fluprostenol单独作用,低于雌激素单独作用时奶牛输卵管上皮细胞输卵管蛋白的表达量。（3）PGE2和PGF2α对奶牛输卵管上皮细胞表达输卵管蛋白的信号转导通路研究。采用RT-PCR和Westernblot法,应用PKA抑制剂H-89、PKC抑制剂Chelerythrine、ERK抑制剂U0126处理输卵管上皮细胞,检测输卵管蛋白的表达水平。本实验结果显示,3μM的H-89和3μM的U0126均可以阻断PGE2促进输卵管蛋白表达的作用。加入5μM的Chelerythrine chloride和3μM的U0126后均抑制了PGF2α所致输卵管蛋白表达降低作用。（4）脂多糖-PGE2-EP2受体、脂多糖-PGF2α-FP受体对奶牛输卵管上皮细胞表达输卵管蛋白的影响研究。采用RT-PCR和Westernblot法,利用LPS刺激输卵管上皮细胞检测输卵管蛋白的表达量。结果发现LPS促进输卵管蛋白的表达,在16 h达到最高。LPS和butaprost共同作用时奶牛输卵管蛋白的表达高于二者单独作用。LPS和fluprostenol共同作用时奶牛输卵管蛋白表达量高于fluprostenol单独作用,而低于LPS单独作用。NF-κB抑制剂NAC抑制LPS所致输卵管蛋白升高作用。总体结论:（1）PGE2通过激活EP2受体上调奶牛输卵管上皮细胞输卵管蛋白的表达;PGF2α通过激活FP受体下调奶牛输卵管上皮细胞输卵管蛋白的表达。（2）雌激素与EP2受体对奶牛输卵管上皮细胞输卵管蛋白的表达调控具有协同作用;雌激素与FP受体对奶牛输卵管上皮细胞输卵管蛋白的表达调控具有相互拮抗作用。（3）PGE2调控奶牛输卵管上皮细胞输卵管蛋白的表达与EP2-cAMP-PKA信号转导途径有关;PGF2α抑制奶牛输卵管上皮细胞输卵管蛋白的表达与FP-Ca2+-PKC信号转导途径有关;PKA、PKC又可以进一步激活ERK通路。（4）LPS通过增加PGE2的含量可以促进EP2受体对奶牛输卵管上皮细胞输卵管蛋白的上调作用;LPS可拮抗PGF2α对奶牛输卵管上皮细胞输卵管蛋白表达的抑制作用;LPS可能是通过NF-κB途径影响PGE2的产生而影响输奶牛输卵管上皮细胞输卵管蛋白的表达。