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目的：比较嗅鞘细胞(OECs)与雪旺细胞(SCs)分别与神经干细胞(NSCs)共培养和联合脑内移植对NSCs增殖、分化及对PD大鼠模型的治疗作用。
方法：1、NSCs培养：取E14.5d SD大鼠室管膜下区(SVZ)组织制备单细胞悬液，接种到含碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、表皮生长因子(EGF)、B27、N<,2>的DMEM/F12(1:1)的无血清培养液中培养，形成原代克隆球后，用有限稀释法进行单细胞克隆和传代扩增，获得大量来源相同的NSCs克隆球，行Nestin免疫组化和Brdu免疫荧光检测。2、OECs与SCs培养：分别取E14.5d SD大鼠嗅球和出生后7d SD大鼠坐骨神经制备单细胞悬液，将细胞浓度调整到1.0×10<'6>个/ml，移至含20％胎牛血清的培养液培养，用P<'75>和S-100免疫荧光鉴定。3、将培养传至第3代的OECs、SCs分别与NSCs共培养，用P<'75>、S-100、Nestin、Brdu、GFAP、NF和TH免疫荧光法分别鉴定细胞增殖与分化。4、用6-OHDA制作PD大鼠模型，将成功PD模型随机分为：PD模型对照组、生理盐水对照组、SCs移植组、OECs移植组、NSCs移植组、SCs+NSCs移植组和OECs+NSCs移植组。5、将上述培养传至第3代的OECs、SCs、NSCs、OECs+NSCs和SCs+NSCs分别移植到PD大鼠吻侧纹状体内，于移植后第7d、14d、28d、56d检测大鼠旋转行为变化后处死并灌流固定取脑，做冰冻切片，行HE染色和Brdu、TH免疫荧光染色。
结果：细胞培养：1、NSCs培养7d时，显示典型的神经球悬浮生长，呈Nestin免疫组化和Brdu免疫荧光阳性；10d后细胞球活性下降，体积不再增大，中心透亮度明显下降；12d后偶见神经球贴壁分化；14d完全分化，GFAP和NF免疫荧光检测显示，大部分为绿色荧光标记的GFAP阳性细胞，部分为绿色荧光标记的NF阳性细胞，少数为红色荧光标记的TH阳性细胞。2、OECs培养7d时，SCs培养9d时，绝大多数呈梭形且发出2～3个突起，少量呈扁平椭圆形，免疫荧光检测呈P<'75>和S-100阳性反应。3、OECs+NSCs、SCs+NSCs共培养组在4d～5d时形成典型的神经球；10d时球体积继续增大，球中心透亮度良好：12d～13d后神经球的体积不再增大，开始贴附在OECs、SCs上生长，可见神经球向四周伸出突起并开始分化；14d时紧贴OECs、SCs生长的NSCs同OECs、SCs广泛交织在一起。S-100及P<'75>免疫荧光染色可见S-100标记的SCs，P<'75>标记的OECs；GFAP、NF和TH免疫荧光染色显示，绿色荧光标记的GFAP和NF阳性细胞，红色荧光标记的TH阳性细胞。其中，NSCs单独培养组、SCs+NSCs共培养组和OECs+NSCs共培养组的GFAP阳性细胞数分别为198.93±27.16、158.24±21.35和105.12±18.57(各组比较P<0.05)；NF阳性细胞数分别为145.83±20.65、186.47±27.05和239.54±28.74(各组比较P<0.05)；TH阳性细胞数分别为10.08±5.52、30.21±12.95和76.27±19.21(各组比较P<0.05)。在体移植：1、各移植组在移植前和移植后第7d、14d、28d及56d，大鼠旋转行为(r/min)分别为：SCs组，20.37±2.41、19.61±2.42、17.41±2.27、15.96±1.82和13.52±1.31：OECs组，19.78±2.32、18.79±2.19、17.16±2.05、15.24±1.52和13.24±1.30；NSCs组，20.01±2.23、18.48±2.25、15.74±2.12、13.44±1.72和11.44±1.21；SCs+NSCs组，20.08±2.17、18.12±2.37、14.98±2.03、12.93±1.60和10.21±1.07；OECs+NSCs组，20.08±2.26、17.91±2.41、14.61±2.04、10.76±1.32和7.37±1.27。SCs和OECs移植组与PD模型对照组和生理盐水组比较，在56d时旋转行为均明显减少(P<0.05)；NSCs组、SCs+NSCs组及OECs+NSCs组与PD模型组和生理盐水组比较，在28d和56d时旋转行为均明显减少(P<0.05)；SCs+NSCs组与SCs组比较，在56d时，旋转行为明显减少(P<0.05)；OECs+NSCs组与SCs组比较，在28d和56d时旋转行为均明显减少(P<0.05)；OECs+NSCs组与OECs组和NSCs组比较，在56d时旋转行为均明显减少(P<0.05)；SCs、OECs、NSCs及SCs+NSCs组在56d时与7d相比，各组旋转行为均明显减少(P<0.05)；OECs+NSCs组在56d时与7d、14d和28d时比较，旋转行为明显减少(P<0.05)。SCs组与OECs组比较旋转行为没有明显差异(P>0.05)，SCs+NSCs组与OECs+NSCs组比较旋转行为没有明显差异(P>0.05)。2、HE染色显示，移植后第7d，移植细胞呈簇状或串状沿针道分布，细胞数量较多。3、Brdu免疫荧光染色显示，移植区Brdu阳性细胞为FITC绿色荧光标记，大多数细胞较小，无突起，呈圆形或椭圆形，少数呈多边形或不规则形态。随着时间的推移，Brdu阳性细胞数量越来越少。4、TH免疫荧光显示，各细胞移植组移植后第7d、14d、28d和56d，移植区均见胞浆呈红色荧光标记的TH阳性细胞。移植后第7d、14d时TH阳性细胞多呈圆形或椭圆形，无明显突起；28d和56d，在针道及其附近TH阳性神经元增多，细胞多数呈多极形或多角形，可见少许突起。第7d、14d、28d和56d，在各移植组针道及其附近TH阳性神经元数量分别为：SCs组，23.53±4.42、32.63±4.46、36.27±6.32和49.75±5.98；OECs组，27.68±4.29、38.65±5.85、44.23±6.75和56.83±6.67：NSCs组，53.26±3.88、98.24±19.53、168.64±23.26和189.21±21.32：SCs+NSCs组，57.47±5.53、 116.04±20.01、 203.31±22.64 和 216.62±22.58； OECs+NSCs组， 60.72±5.39、123.65±21.42、227.31±21.47和245.45±25.43。与PD模型组、生理盐水组、SCs组和OECs组相比，NSCs组、SCs+NSCs组和OECs+NSCs组在移植后各时间点的TH阳性细胞数均明显增多(P<0.05)；与NSCs组相比，在28d、56d时SCs+NSCs、OECs+NSCs共移植组的TH阳性细胞数明显增多(P<0.05)。SCs组与OECs组比较没有明显差异(P>0.05)，SCs+NSCs组与OECs+NSCs组比较没有明显差异(P>0.05)。
结论：1、从SD大鼠E14.5d的SVZ组织可以分离得到具有不断增殖和自我更新的NSCs。2、从SD大鼠E14.5 d嗅球和出生后7d的坐骨神经分离得到的细胞，体外培养后可分别被特异性抗体P<'75>和S-100标记，观察到细胞形态特征与文献报道一致，证实是OECs和SCs。3、在体外培养条件下，OECs和SCs有促进NSCs增殖和诱导其分化的作用，OECs+NSCs及SCs+NSCs共培养组分化为神经元的比例高于星形胶质细胞，神经元的突起生长更长，部分可分化为TH阳性神经元，OECs+NSCs共培养组的TH阳性细胞数多于SCs+NSCs共培养组。4、OECs、SCs、NSCs单独移植和OECs+NSCs及SCs+NSCs联合移植均能不同程度改善PD大鼠的旋转行为，其中OECs+NSCs联合移植优于单独移植。5、在体移植情况下，OECs和SCs能够诱导E14.5d的SVZ来源的NSCs向TH阳性神经元分化，其中SCs+NSCs和OECs+NSCs共移植组均能明显提高NSCs向TH阳性细胞分化的比例。6、OECs、SCs和NSCs是可供选择用于中枢神经系统(CNS)损伤修复和再生的理想种子细胞，OECs或SCs与NSCs联合移植效果更好。