【摘 要】
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从中国春小麦中克隆了乙酰辅酶A羧化酶2325bp的CT功能域基因,连入pET28a+载体,构建了重组质粒RCP18-5。经DNA序列测定确定了克隆到的基因即为小麦ACCase CT功能域基因。序列
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从中国春小麦中克隆了乙酰辅酶A羧化酶2325bp的CT功能域基因,连入pET28a+载体,构建了重组质粒RCP18-5。经DNA序列测定确定了克隆到的基因即为小麦ACCase CT功能域基因。序列分析表明,RCP18-5包含的目的基因序列是对已报道中国春小麦ACCase CT功能域基因的补充和修正。该序列已经被GeneBank收入(基因编码:EU124675)。重组质粒RCP18-5可以在大肠杆菌中以可溶形式大量表达。表达的His-融合蛋白经亲合层析及凝胶过滤层析纯化而得到高纯度的目标蛋白。蛋白性质实验表明,重组蛋白在溶液中以多聚体形式存在,且具有较强的疏水性,与除草剂之间存在较强的相互作用。酶活性分析结果表明,重组蛋白在pH7.0时被强烈激活,这与全酶在pH8.0时被激活是不同的。另外,某些金属离子对该蛋白也有激活作用,是首次报道金属离子与CT功能域间的相互作用。RCP18-5表达并纯化的重组蛋白在研究CT功能域性质,除草剂与CT功能域相互作用的分子机制,以及筛选新的除草剂等方面有重要的应用价值。
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