桂枝甘草药对抗心律失常有效部位的研究

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目的:桂枝、甘草配伍用于治疗心悸,出自汉·张仲景《伤寒论·辨太阳病脉证并治》篇,第64条桂枝甘草汤,“发汗过多,其人叉手自冒心,心下悸,欲得按者,桂枝甘草汤主之。”为温补心阳之基础方。仲景以来,后世医家治疗心阳不足之证多由此方加味而成,近现代更是有所发展,如含此药对的桂枝甘草汤,炙甘草汤,桂枝甘草龙骨牡蛎汤等广泛运用于心律失常,冠心病心绞痛等心血管疾病和其他多种病症。现代药理、化学研究提示桂枝甘草(以下简称桂甘)药对确实对心律失常有独特疗效,含桂枝甘草药对的中药复方对心律失常具有双向调节作用,并能明显提高患者生存质量,缓解临床症状,与我们对抗心律失常药物应具备的预期特点十分吻合,具有比较可观的开发潜力,值得进一步深入研究。  本课题选择仲景经方中的这一经典药对作为研究对象,以中医临床习用的汤剂剂型为切入点,应用心律失常动物模型,综合药效筛选和化学分离技术探讨其抗心律失常的有效部位,对桂枝甘草配伍用于治疗心律失常的药效物质基础进行系统研究并建立相应的有效部位评价指标,旨在借助对桂枝甘草药对的系统研究,为开发临床有效的抗心律失常中成药提供实验研究基础。  方法:在系统总结相关研究文献的基础上,本课题选择中医临床治疗心律失常常用方剂中桂枝甘草经典药对为研究对象,应用氯仿致小鼠心律失常模型,对桂甘药对抗心律失常的药物配伍比例进行筛选以确定最佳药效比例,并对其是否有诱发心律失常的作用进行考察;进而应用系统溶剂法提取分离桂甘的各极性部位,并应用心律失常动物模型对其进行活性筛选;对筛选得出的活性部位进行系统的化学成分研究,同时应用紫外分光光度法、HPLC法和GC-MS等方法进行含量测定以及指纹图谱的研究,建立桂甘抗心律失常有效部位群的质量评价指标。  结果:  1.桂甘抗心律失常的最佳药效比例为桂枝与甘草(炙)按2:1的比例配伍,且其水煎液无明显的诱发心律失常作用;  2.桂甘水提液、挥发油部位,乙酸乙酯部位、乙酸乙酯部位大孔树脂30﹪乙醇洗脱部位和肉桂酸对心律失常小鼠均有不同程度的保护作用;  3.乙酸乙酯部位经化学预试,结果表明其主要含黄酮类和香豆素类成分,经HPLC方法与甘草苷和肉桂酸对照品对照,结果表明其主要含肉桂酸和甘草苷,乙酸乙酯部位对小鼠心律失常的保护作用可能与此二成分有关。  4.乙酸乙酯部位大孔树脂30﹪乙醇洗脱部位经化学预试,结果表明主要含黄酮类成分,用紫外分光光度法测其总黄酮含量达50﹪以上,初步命名为桂甘黄酮部位;  5.采用《中国药典》2005年版甘草项下甘草苷的含量测定方法测定了黄酮部位中甘草苷的含量达39.38﹪;  6.建立了桂甘黄酮部位的HPLC指纹图谱,其相似度达95﹪以上,并初步确定了254nm波长下的5个特征峰作为桂甘黄酮部位的HPLC色谱指纹特征,5个特征性成分相对百分含量达69﹪以上,其中甘草苷的相对百分含量占41﹪以上;  7.建立了桂甘挥发油部位的GC-MS指纹图谱,其相似度达92﹪以上,初步确定了7个特征峰作为桂甘挥发油部位的GC-MS色谱指纹特征,7个特征性成分相对百分含量达67﹪以上,其中桂皮醛的相对百分含量占50﹪以上。  结论:本课题确定桂甘抗心律失常的最佳药效比例为桂枝与甘草(炙)按2:1的比例配伍;初步确定桂枝甘草药对抗心律失常的有效部位群为桂甘乙酸乙酯部位大孔树脂30﹪乙醇洗脱部位(即黄酮部位)和挥发油部位,药效作用物质可能与甘草苷、桂皮醛和肉桂酸有关;本课题建立的黄酮部位HPLC指纹图谱可初步作为桂甘黄酮部位内在质量的评价指标;本课题建立的挥发油部位GC-MS指纹图谱可初步作为桂甘挥发油部位内在质量的评价指标。
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