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目的:观察IFN-α2b、5-FU以及IFN-α2b联合5-FU对绒癌JEG-3细胞增殖、凋亡以及细胞内表达TRAIL的影响,研究IFN-α2b及IFN-α2b联合5-FU治疗绒癌的可行性及其机制。方法:(1)倒置显微镜下观察细胞形态将细胞分成四组:IFN-α2b组:加入终浓度为5×10~4IU/ml的IFN-α2b溶液;5-FU组:加入终浓度为0.5mg/ml的5-FU溶液;IFN-α2b联合5-FU组:加入IFN-α2b与5-FU的混合溶液使其终浓度分别为5×10~4IU/ml和0.5mg/ml;对照组:加入完全培养液。调节使每组含有相同浓度的DMSO。细胞培养48小时后倒置显微镜观察细胞形态,并摄片。(2)CCK-8法检测JEG-3细胞生长抑制率IFN-α2b组:分别用1×10~4IU/ml、5×10~4IU/ml、1×10~5IU/ml、5×10~5IU/ml IFN-α2b处理细胞24、48、72小时。5-FU组:分别用0.1mg/ml、0.25 mg/ml、0.5mg/ml、1mg/ml5-FU处理细胞24、48、72小时。IFN-α2b联合5-FU组:5×10~4IU/ml IFN-α2b分别联合0.1mg/ml、0.25 mg/ml、0.5mg/ml、1mg/ml5-FU作用24、48小时。对照组:加入完全培养液。以上各组均调节使每孔含有等浓度DMSO。CCK-8法检测细胞生长抑制率。用SPSS软件Probit回归分析计算各时间点的IC50。用方程D=[(Ac/Ae)+(Bc/Be)]检验两药物联用是否具有协同作用。(3)流式细胞仪检测JEG-3细胞凋亡率和细胞周期IFN-α2b组:加入终浓度为5×10~4IU/ml的IFN-α2b溶液;5-FU组:加入终浓度为0.5mg/ml的5-FU溶液;IFN-α2b联合5-FU组:加入IFN-α2b与5-FU的混合溶液使其终浓度分别为5×10~4IU/ml和0.5mg/ml;对照组:加入完全培养液。调节使每组含有相同浓度的DMSO。作用24、48小时后PI染色,于流式细胞仪检测细胞凋亡率和细胞周期。(4)免疫细胞化学SP法检测JEG-3细胞内TRAIL的表达IFN-α2b组:加入终浓度为5×10~4IU/ml的IFN-α2b溶液;5-FU组:加入终浓度为0.5mg/ml的5-FU溶液;IFN-α2b联合5-FU组:加入IFN-α2b与5-FU的混合溶液使其终浓度分别为5×10~4IU/ml和0.5mg/ml;对照组:加入完全培养液。调节使每组含有相同浓度的DMSO。阳性对照组:hepG-2细胞;阴性对照组:加入完全培养基。作用24小时后免疫细胞化学SP法染色。结果:(1)倒置显微镜下观察细胞形态对照组细胞生长良好,细胞饱满、伸展、呈不规则形状。IFN-α2b组细胞缩小,细胞间隙增大,分界清楚。5-FU组细胞改变类似于IFN-α2b组。IFN-α2b联合5-FU组:细胞数目减少更加明显,培养瓶底仅存少量缩小变圆的细胞,细胞间隙更大,培养液中出现大量悬浮的死细胞。(2)CCK-8法检测JEG-3细胞生长抑制率IFN-α2b组和5-FU组对细胞的抑制均具有浓度和时间依赖性:同一浓度随作用时间延长,细胞生长抑制率增大,组间差异均具有统计学意义,P<0.05。同一作用时间,浓度越大细胞生长抑制率越大,其差异均具有统计学意义,P<0.05。细胞生长抑制率与IFN-α2b或5-FU的浓度及其作用时间具有相关性,P<0.05。IFN-α2b作用24小时、48小时及72小时的IC50分别为:9.65×10~6IU/ml、2.72×10~5IU/ml、1.44×10~5IU/ml。5-FU作用24小时、48小时及72小时的IC50分别为:1.829 mg/ml、0.639mg/ml、0.438mg/ml。IFN-α2b联合5-FU组作用24小时和48小时后生长抑制率远远高于单用对应浓度的IFN-α2b及5-FU组,P<0.05,具有统计学意义。随着5-FU浓度的增大,生长抑制率增大。联合用药组24小时和48小时后5-FU的IC50分别为0.761mg/ml和0.240mg/ml。24小时和48小时D值分别为0.42和0.55,认为联合用药具有协同效应。(3)流式细胞仪检测JEG-3细胞凋亡率和细胞周期作用24、48小时后各药物干预组凋亡率均明显大于对照组,P<0.05。联合用药组细胞凋亡率明显高于单用5-FU及IFN-α2b组,其差异有统计学意义,P<0.05。作用24、48小时后,各药物干预组较对照组G0/G1期细胞百分比增加,G2/M期细胞百分比减少,P<0.05。联合用药组G0/G1期细胞百分比大于单独用药组,P<0.05。(4)免疫细胞化学SP法检测JEG-3细胞内TRAIL的表达各药物干预组细胞内TRAIL表达均增强,HSCORE评分均大于对照组,有显著差异,P<0.05。联合用药组HSCORE评分大于各单独用药组,P<0.05。结论:1.IFN-α2b和5-FU均能够抑制绒癌JEG-3细胞增殖,其作用具有时间依赖性和浓度依赖性。IFN-α2b和5-FU联用对抑制JEG-3细胞增殖有协同作用。2.IFN-α2b和5-FU均能诱导JEG-3细胞凋亡,两药联用能增加细胞凋亡率。3.IFN-α2b和5-FU均能诱导JEG-3细胞内TRAIL的表达,IFN-α2b和5-FU联用能增加细胞内TRAIL的表达。4.IFN-α2b和5-FU均可能通过诱导JEG-3细胞内TRAIL的表达,促进细胞凋亡,从而抑制细胞增殖。两药联用可能通过此机制发挥协同作用。