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目的构建结核分支杆菌融合基因lhp-esat6和2×esat-6原核表达载体,分别在大肠杆菌和耻垢分支杆菌中同时诱导表达融合蛋白rCFP10-ESAT6和rdESAT-6,纯化蛋白,Western-blot分析其抗原性,并初步评估其诊断价值。方法以结核分支杆菌H37Rv基因组DNA为模板,经PCR扩增lhp和esat-6基因;用基因延伸拼接技术（SOE）将lhp和esat-6基因体外重组,构建lhp-esat6融合基因,并将其克隆至pET28a和pMF41质粒中分别构建pET28a-lhp-esat6和pMF41-lhp-esat6原核表达载体。以DNA疫苗HG856A2为模板,经PCR扩增2×esat6基因,并将其克隆至pET28a和pMF41质粒中分别构建pET28a-2×esat-6和pMF41-2×esat-6原核表达载体。将pET28a-lhp-esat6和pET28a-2×esat-6重组质粒转化E.coli BL21（DE3）,以IPTG诱导表达融合蛋白rCFP-ESAT6（E.coli）和rdESAT-6（E.coli）。将pMF41-lhp-esat6和pMF41-2×esat-6重组质粒电转化耻垢分支杆菌M.smegmatis,以乙酰胺诱导表达融合蛋白rCFP10-ESAT6（M.smeg）和rdESAT-6（M.smeg）。通过SDS-PAGE鉴定其表达形式,用Ni2+柱亲和层析纯化融合蛋白;用rESAT-6小鼠抗血清对纯化的四种融合蛋白进行Western-blot分析抗原性;用间接ELISA方法检测其抗结核抗体的敏感性和特异性,并以重组蛋白刺激IFN-γ全血试验（IGRA）评估重组抗原在结核病诊断中的价值。结果成功构建了原核表达载体pET28a-lhp-esat6、pET28a-2×esat-6、pMF41-lhp-esat6和pMF41-2×esat-6。融合蛋白在两种表达系统中均以包涵体形式表达;经Ni2+柱亲和纯化的样品SDS-PAGE分析纯度在95%以上,并且四种融合蛋白均可与rESAT-6小鼠抗血清发生特异性反应。间接ELISA检测结果表明:用rCFP-ESAT6纯化蛋白进行结核病血清学诊断的敏感性为25%（5/20）,特异性为95.8%（23/24）;用rdESAT-6纯化蛋白进行结核病血清学诊断的敏感性为30%（6/20）,特异性为95.8%（23/24）,略好于文献报道的rESAT-6结果。结论本研究成功制备了结核分支杆菌的四种融合蛋白,并以此抗原建立了间接ELISA方法用于检测结核抗体试验;以及检测细胞免疫的IGRA试验,为以rCFP10-ESAT6和rdESAT-6为抗原的结核病免疫学诊断试剂研制奠定基础。