平卧菊三七中酚类化合物的提取分离与体外抗氧化和抗炎功效研究

来源 :中南林业科技大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:chen19881220
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平卧菊三七含有丰富的酚类化合物,具有消炎、抗病毒、降压、降糖、降脂、抗氧化、促愈合等功效。在2012年5月,平卧菊三七被国家卫生部指定为新资源食品。为了更好的研究和推广平卧菊三七这种药食两用的蔬菜,本文以平卧菊三七为原料研究了平卧菊三七酚类化合物的提取工艺和分离纯化方法,及其提取物的体外抗氧化和抗炎功效。(1)通过比较平卧菊三七不同极性溶剂、不同原料部位提取液的功效成分含量,溶剂中酚类化合物成分含量:水>甲醇>乙醇>丙酮>乙酸乙酯>正丁醇>三氯甲烷,根部>叶部>茎部。冷冻干燥和60℃热风干燥方式获得的提取液具有更强的抗氧化活性和更高的酚类化合物提取得率。选用乙醇水溶液作为提取溶剂,在50℃条件下,按1:25(m/V)加入一定体积比的60%(体积比)乙醇水溶液混合,并用21 KHz的超声波辅助提取50min作为最佳提取方法。抗氧化活性(FRAP法、DPPH法和ABTS法)与总酚、总黄酮和绿原酸含量显著相关(P<0.05),与总酚相关系数R分别为0.919,0.848,0.907,与总黄酮含量相关系数R分别为0.915,0.793,0.823,与绿原酸含量相关系数R分别为0.887,0.927,0.900,与Vc含量相关性较低。(2)通过对平卧菊三七多酚提取物进行分离纯化,为平卧菊三七的进一步推广应用提供理论依据。采用超声波辅助浸提法提取多酚提取液为原料,利用大孔树脂柱层析对粗多酚进行纯化。结果表明,NKA-9大孔树脂最适合纯化平卧菊三七多酚;较适宜的条件为:将3.0mg/mL的多酚提取液以2BV/h的进样流速上样;洗脱时用70%的乙醇做洗脱液进行动态洗脱,洗脱剂用量为2BV。用此方法纯化后的平卧菊三七多酚的纯度从24.83%提高到78.43%;经HPLC分析和鉴定,NKA-9分离纯化平卧菊三七酚类物质不会造成单体酚组成变化和明显损失,且主要由绿原酸组成。平卧菊三七提取液经纯化后的抗氧化活性有所增强。(3)探讨平卧菊三七不同极性萃取部位的体外抗炎和抗癌作用。采用极性由低到高分离得到平卧菊三七三氯甲烷萃取物、乙酸乙酯萃取物、正丁醇萃取物、萃余相4个部位,建立LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞炎症模型,检测平卧菊三七四个部位萃取物对炎症因子NO分泌的影响。并采用HPLC-ESI-MS检测四种萃取物中的有效成分。通过RAW264.7炎症模型的筛选,平卧菊三七乙酸乙酯部位(10μg/mL)可显著抑制模型细胞NO的分泌,且不抑制RAW264.7细胞增殖。三氯甲烷部位(100、200μg/mL)可显著抑制Hela细胞的生长,可能与平卧菊三七中的没食子酸和萜类化合物有关。
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