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实验目的:研究髓核间充质干细胞和髓核细胞修复退变椎间盘能力的差异,为髓核间充质干细胞治疗退变椎间盘的进一步应用提供实验根据。实验方法:1.髓核间充质干细胞的分离培养及生物活性检测:髓核间充质干细胞是通过流式细胞分选术获得并培养,并进行成骨、成软骨、成脂细胞诱导分化实验。成骨分化检测包括碱性磷酸酶染色和和茜素红染色。成软骨分化与成脂肪检测分别是通过甲苯胺蓝染色鉴定与油红O染液染色完成。2.髄核细胞的分离培养及生物活性检测:髓核细胞是通过细胞贴壁法获得并培养,进行增殖能力的检测、Ⅱ型胶原染色和甲苯胺蓝染色。3.实验分组:将32只兔子进行退变椎间盘模型建立,造模后随机分为A、B、C、D组,分别为空白对照组,髓核间充质干细胞移植组,髓核细胞移植组,单纯培养液对照组。4.影像学检查:在细胞移植1d前及细胞移植12w后,行X线检查以评估椎间盘高度指数(DHI%),行MRI检查以计算髓核区域相对信号强度(RSI)。5.PCR检测:提取总RNA,把内参引物序列GAPDH的表达量除胶原蛋白Ⅱ、蛋白聚糖的表达量,得到胶原蛋白Ⅱ、蛋白聚糖的相对表达量。6.蛋白聚糖及Ⅱ型胶原蛋白定量检测。7.统计学分析:选用spss20.0软件进行数据统计学分析。计量资料用均数±标准差(x±s)表示,组间进行单因素方差分析,以P<0.05表示统计学差异显著,P>0.05表示无明显统计学差异。主要结果:1.髓核间充质干细胞在成骨诱导分化及检测中,碱性磷酸酶染色和和茜素红染色均显示阳性显色。在成软骨和成脂诱导分化及检测中见甲苯胺蓝染色见细胞呈蓝色,并有大小不等的脂滴形成。2.兔原代髓核细胞呈圆形,形态大小均一。细胞增殖活力在早期较低,而在5d-13d时明显增强。甲苯胺蓝染色与Ⅱ型胶原蛋白免疫组化染色见阳性。3.在移植12w后,B组的高度指数(DHI%)与其他组相比明显增高,有显著性差异(P<0.05)。B组的RSI值比C组明显增强,显著性差异(P<0.05)。4.在PCR检测和蛋白聚糖及Ⅱ型胶原蛋白定量检测可知,B组在蛋白聚糖及Ⅱ型胶原蛋白的基因表达水平高于其他组,有统计学意义。B组比C组蛋白聚糖的蛋白表达水平高,有显著性差异,但四组在Ⅱ型胶原蛋白表达水平上差异无统计学意义(P>0.05)。实验结论:髓核间充质干细胞与髓核细胞均能提高退变椎间盘内蛋白聚糖和Ⅱ型胶原蛋白基因水平的表达,促进退变椎间盘的修复,但髓核间充质干细胞的修复效果比髓核细胞更好。髓核间充质干细胞或许能进一步应用于治疗退变椎间盘方面。