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本研究首次探讨了升高CO2浓度诱导薇甘菊化感作用的分子机理,揭示了升高CO2浓度诱导外来入侵植物通过增强化感作用而加剧入侵的分子机制,为有效的控制有害植物入侵提供参考依据。
大气CO2浓度升高是全球变化的重要方面。据联合国政府间气候变化专门委员会(Intergovernmental Panel on Climate Change,IPCC)预测到21世纪末,大气中CO2的浓度将会由目前的350ppm达到700ppm左右。薇甘菊(Mikania micrantha H.B.K)是入侵我国华南地区的主要外来有害植物之一。目前从化感作用角度提出的"新奇武器"假说为外来入侵植物提出了一种新的理论基础。CO2浓度的升高会使植物同化物在体内的含量和分配发生变化,影响植物次生代谢物质的形成和分泌以及植物的化感作用。目前有关升高CO2浓度诱导入侵植物化感作用分子机制的研究尚未见报道。
本研究主要研究结果如下:
1.通过构建升高CO2(750ppm)浓度诱导薇甘菊叶片的正向抑制性差减杂交(suppression subtractive hybridization,SSH)文库,获得349个质粒,整理测序结果后获得244条表达序列标签(Expressed Sequence Tag,EST)。筛选到了与具有化感作用的植物挥发性倍半萜——β-石竹烯合成相关的β-石竹烯合成酶,利用RACE(rapid amplification of cDNA ends,RACE)的方法克隆该基因cDNA全长1898 bp,编码547个氨基酸。
2.应用Real—time PCR分析表明升高CO2浓度可诱导薇甘菊叶片中β—石竹烯合成酶基因的表达量增加。运用GC—MS和GC测定结果显示升高CO2浓度增加了薇甘菊叶片中β—石竹烯的含量。同时生物测定不同CO2浓度下β—石竹烯对受体植物化感潜力的变化,结果在高浓度CO2条件下,β—石竹烯化感潜力明显增强,尤其是对萝卜(Raphanus sativus)。因此,升高CO2浓度可以诱导薇甘菊通过增强化感作用而加剧入侵。
3.利用RT—PCR研究了薇甘菊β—石竹烯合成酶mRNA在根、茎、成熟叶片、幼嫩叶片、叶柄、花和种子等不同组织部位中的分布表达情况。结果显示:薇甘菊β—石竹烯合成酶在成熟叶片和幼嫩叶片中表达量最高,在茎、叶柄和花中表达量次之,在根中表达量最低,种子中不表达。机械损伤薇甘菊叶片后连续5天的时间,在损伤后的第1至3天可诱导β—石竹烯合成酶基因的表达,且第1天的表达量最高,第4,5天与对照无差异,表明β—石竹烯合成酶与薇甘菊的防御功能相关。
4.构建了薇甘菊β—石竹烯合成酶亚细胞定位表达载体:35S::MmCS—GFP,结果显示β—石竹烯合成酶定位在细胞质和细胞膜。
5.发现了一种可以致使薇甘菊萎蔫的新病毒,该病毒属于豇豆花叶病毒科(Comoviridae)蚕豆病毒属(Fabavirus),将其命名为薇甘菊萎蔫病毒(Mikania micrantha wilt virus,MMWV)。MMWV与龙胆花叶病毒(Gentian mosaic virus,GeMV)的核酸同源性为75.6%,与蚕豆萎蔫病毒—1(Broad bean wilt virus—1,BBWV—1)的核酸同源性分别为56.6%和57%,与蚕豆萎蔫病毒—2(Broad bean wilt virus—2,BBWV—2)的核酸同源性为55.7%至58%。结果表明MMWV为蚕豆病毒属龙胆花叶病毒的一种新的分离株。虽然MMWV不能使薇甘菊致死,但可有效的抑制薇甘菊的生长,因此利用MMWV来控制薇甘菊的生物入侵值得做深入的研究。