本研究目的是建立荷斯坦奶牛和罗米莉羊供核体细胞系及对其生物学特性进行研究。试验一建立了适合成年荷斯坦奶牛、罗米莉羊耳部皮肤成纤维细胞体外培养的体系,用组织块法和不完全消化法培养的原代细胞生长状态良好,增殖旺盛。在传代培养过程中,用冷胰蛋白酶控时消化,得到了纯化的皮肤成纤维细胞。并对基础培养液进行了筛选,绘制了生长曲线。结果表明:该培养系统适合皮肤成纤维细胞的体外培养,DMEM、DMEM/F12 和RPMI1640 添加10%的血清和100IU/ml 双抗后均能满足培养细胞的生长需要。试验二建立了荷斯坦奶牛、绵羊卵丘/颗粒细胞的培养体系,结果表明:该培养体系中卵丘/颗粒细胞的倍增时间分别为1.14d 和1.08d。试验三探讨了绵羊卵丘/颗粒细胞在不同生长状态、不同传代次数的细胞周期特征和不同处理方法对细胞周期的影响。流式细胞仪分析结果显示:(1)未发现异倍体细胞;(2)第3 代和第13 代细胞不同汇合度处于G0/G1期细胞的比例分别为76.6±1.7%、83.4±1.65%、84.53±2.27%和66.8±1.84%、72.8±2.09%、76±3.41%。第3 代细胞经低温冷藏处理6h和直接血清饥饿培养3d后,处于G0/G1期细胞的比例分别为93.3±2.1%、92.43±1.02%。结果表明:低代细胞处于G0/G1期的比例显著高于高代的(P<0.05),低温冷藏法和血清饥饿法均能极显著地提高处于G0/G1期细胞比例(P<0.01)。