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大肠癌是我国位居第四位的常见恶性肿瘤，其发病率和死亡率呈逐年上升的趋势，发病年龄明显提高，发病部位也发生变化，从原来的直肠癌多于结肠癌转变为结肠癌多于直肠癌。近年来对大肠癌从基础和临床进行了深入的研究和探索，目前已明确，大肠癌的发生是由遗传和环境因素相互作用的结果，涉及到多个癌基因和抑癌基因的改变。在大肠癌的治疗上提出了综合治疗模式，包括手术、化疗、放疗和生物治疗，其目的是不仅要提高治愈率，而且应当改善患者的生活质量。基因治疗则是肿瘤生物治疗的崭新领域，其应用基因工程技术直接纠正肿瘤细胞基因的结构及(或)功能缺陷，或者间接通过增强宿主对肿瘤细胞的杀伤和防御能力来治疗肿瘤。有关大肠癌的基因治疗到目前主要有自杀基因治疗(HSV-TK/GCV系统、CD/5-FC系统)、针对原癌基因和抑癌基因的治疗、免疫基因治疗和抗血管内皮生长因子(VEGF)基因治疗。 肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体(tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand,TRAI)基因是TNF家族的新成员，山于它的选择性细胞毒作用，即TRAIL仅诱导肿瘤细胞、转化细胞或病毒感染细胞死亡，而不能诱导正常细胞凋亡，使其在肿瘤的基因治疗中应用前景广阔。它有5个受体：DR4、DR5、DcR1、DcR2、OPG(Osteoprotegerm)。TRAIL的活性形式与前两者结合能诱导细胞凋亡，而后三者与TRAIL结合，则抑制TRAIL的诱导细胞凋亡作用。DcR1、DcR2与DR4、DR5的区别在于其缺乏或仅含部分死亡功能域DD(Death domain)，与TRAIL结合后并不能将凋亡信号下传，而仅起到“诱骗”作用。TRAIL对正常组织的保护作用其中之一就是因为TRAIL所具有的独特的“诱骗”受体(DcR)，它能与DR4和DR5竞争结合TRAIL。有关TRAIL，基因的杀伤作用需补充的是TRAIL 浙江大学硕士学位论文 中文摘要 基因所具有的旁观者效应，这一点对于其作为肿瘤的基因治疗尤为重要。而这种作用主要 是通过膜结合或可溶性的TRAIL分于与领近细胞的死亡受体相结合而产生的。从TRAIL的 发现至今，己证实TILML对大多数的肿瘤细胞有杀伤作用，而且不仅仅是在培养细胞水平， 有的己经在荷瘤动物身上得到结论。 本实验利用双重腺病毒载体介导TRAIL基因表达，通过倒置显微镜、My法、流式 细胞仪观察TRAIL g因对培养的大肠癌细胞株HT29的杀饬作用，为TRAIL基因治疗大 肠癌打下一定基础。 材料和方法 重组腺病毒AdJGT－TRAIL、Ad／GT－B。（阳性对照基因）、Ad’GT－LacZ（阴性对照基 因，其基因产物为半乳糖酶）和AMIGK．GV由方炳良教授惠赠，分别携带人TRAIL、Bax 和细菌LacZ基因。腺病毒EI转化的人胚胎肾细胞株293由浙江大学医学院阴属邵逸夫医院中 心实验室保存、人大肠癌细胞株HT29由浙江大学医学院崔梭辉博士惠赠。实验试剂：① MTT试剂：②nnnXllPI凋亡试剂盒。通过倒置显微镜、MTTj去、流式细胞仪观察TRAIL 基因对培养的大肠癌细胞株HT29的杀伤作用，并采用SPSS］00统计学软件包进行统汁分析。 结果和讨论 1气 各中重组腺病毒滴度均为IX 10’Opartlcal／ml。 2、Ad／GT－TRAJL与 Ad’GT－B工感染人大肠癌细胞株 HT29后，叮＜；起 HT29出现明显的 形态学改变，当联合 AdPGK－GV16后，该改变吏为显著。而 Ad．GTLacZ和 AdiGT．LacZ＋ AWhGK－GV旧感染时，细胞不出现明显的形态学改变。 3、用 MTT法显示 AdGT－TRAIL、Ad／GTEax和 AdjGT－LacZ对HT29细胞的生长抑制 率分别为543％、四ZO／O和口1％爪联合＊山下＊卜＊V16后，各组生长抑制率均上儿分别为 827％、5740／b和 142％，TRAIL和 Bax组与 LacZ、PBS对照组之I句在抑制 HT29细胞生 长方面有显著性差异（p＜005），TILUL和 Bax组在联合 Ad／PGK－GV16前后亦有显著性差异 则os），同时TRAIL和Bax组之间也有显著差异，在联合AMIGK0V16后该差异更为 显著（p＜001）。 2 浙江大学硕士学位论文 中文摘要 4、AdiGT－TRAIL、AdjGT七ax和 AdjGT．LacZ作用 5大后的凋亡率分别为 1119七、126％ 和 712％，而 pBS对照组的凋亡率为 615％。AW－TRAIL、Ad／GT－Bax与 AdiGT－LacZ、 PBS组相比有显著性差异（p＜005），Ad／GT－LaCZ与PBS对照组之间无显著性差异Oo05）， 联合AdjPGK－GV16后各组的凋亡率均有显著性增高（P＜．05），分别为24．6％、282o和 138％。Ad／GT．TRAIL与Ad。GT－Bax之间在联合Ad／PGK－GV16前后均无显著性差异，联 合 AMIGK－