目的:分析葛根芩连汤(GQD)含有的主要活性成分和作用靶点,筛选GQD作用于结肠癌的关键靶点,构建“药物-成分-靶点-疾病”网络,并探讨GQD抗结肠癌的作用机制。方法:我们通过中药网络药理学筛选中药GQD的有效化合物,分析这些化合物直接作用的且已被证实的靶蛋白。同时筛选在结肠癌发生、发展过程中发挥重要作用的蛋白,构建蛋白-蛋白相互作用(PPI)网络。然后,对中药作用于结肠癌的靶蛋白进行GO功能和KEGG通路富集分析。最后,通过CCK8细胞增殖实验观察GQD带药血清对HT29和CT26细胞增殖的影响;通过Transwell小室细胞迁移实验验证GQD带药血清对HT29细胞迁移的影响;并采用Western blot实验探讨GQD抑制结肠癌细胞增殖、迁移的机制。结果:通过网络药理学分析,我们确定了中药GQD直接作用的且已被证实的靶蛋白共有267种。对这些靶蛋白的基因进行KEGG通路富集分析,发现其主要富集在激素、炎症、结肠癌、糖尿病等信号通路上。同时,我们共筛选出266种参与结肠癌生物学进程的靶点,其中有44种靶点是GQD直接作用的靶点,构建了“中药GQD-化合物-共有靶蛋白-结肠癌”网络。对这44个靶基因进行GO功能富集分析后发现,这些靶基因主要富集在负向调控细胞凋亡、负向调控细胞死亡、调控细胞增殖等生物学功能上。KEGG通路富集分析发现其主要富集在结肠癌、癌症、Erb B、PI3K/Akt等信号通路上。在体外实验中,我们发现高剂量GQD带药血清可显著抑制HT29和CT26细胞的增殖(P<0.05);其次,高剂量GQD带药血清还可抑制HT29细胞的迁移(P<0.05);最后,我们发现GQD带药血清可显著抑制EGFR、PI3K蛋白的表达,降低P-Akt/Akt的比值(P<0.05)。结合网络药理学和体外实验结果,我们认为GQD抑制结肠癌细胞的增殖和迁移可能是通过抑制EGFR蛋白的表达以及PI3K/Akt信号通路的激活来实现的。结论:中药GQD可通过抑制EGFR蛋白的表达和PI3K/Akt信号通路的活化抑制结肠癌细胞的增殖和迁移。