人源抗戊型肝炎病毒单克隆抗体的获得、鉴定与表达

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戊型肝炎(HE)是戊型肝炎病毒(HEV)引起的一种急性病毒性肝炎.1955-1956年在印度新德里首次暴发,随后一些发展中国家相继有暴发流行的报道.戊型肝炎主要在发展中国家呈地区性或散发性传播,青壮年易感,病死率较高,中晚期孕妇感染HEV死亡率可高达20%.1986-1988年在中国新疆曾有较大规模的暴发流行,波及人数约20万,流行病学研究表明我国也是戊型肝炎高发区.近年来的研究资料提示,HE还可能是一种人畜共患性传染病.由于HEV体外培养未获成功,阻碍了HEV疫苗的研究进展,临床尚无特异性治疗HE的免疫制剂.本室曾用6例HEV自然感染的患者外周血淋巴细胞混合总RNA构建抗HEV特异性噬菌体抗体库,库容量为1.8×10<7>,酶切鉴定Fab重组率为20%.库容量已达建库水平,但Fab重组率不够理想.采用国内外较常使用的三轮筛选法未获得特异克隆.该研究应用近年来发展起来的噬菌体展示抗体库技术,用含中和抗原表位的HEV代表株ORF2混合抗原为包被抗原,采用独特的五轮筛选法成功地从Fab重组率仅为20%的人源抗HEV噬菌体抗体库中筛选到抗含中和抗原表位的HEV ORF2混合抗原的噬菌体抗体,并在大肠杆菌中成功地表达了可溶性抗体Fab,为HEV的诊断、预防、治疗以及致病机理的研究奠定了坚实的实验基础.
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