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为建立牛瑟氏泰勒虫病的分子诊断方法和研制该病的核酸疫苗,本研究首先对牛瑟氏泰勒虫国内分离株P33基因进行了克隆与测序,并构建了P33基因原核表达质粒pET-28a-P33;根据P33基因的保守序列建立了该病的PCR诊断方法;又以表达的P33重组蛋白为抗原建立了该病的间接ELISA诊断方法;最后,构建了重组质粒pVAX1-P33-P23。试验结果表明,所克隆的牛瑟氏泰勒虫国内分离株P33基因片段长度为868 bp,编码283个氨基酸,有2个潜在的糖基化位点,与韩国株(AF521557)、日本株(AB016280)和俄罗斯株(AB016279)的核苷酸序列同源性分别为99.4%、88.0%和88.1%;经Western blotting检测结果表明,P33基因在大肠杆菌中成功得到表达,表达蛋白主要以包含体形式存在,并具有较好的反应原性;所建立的PCR诊断方法对75份被检样本的阳性检出率为72.0%,显著高于血涂片镜检法42.7%(P<0.01),该法能检测出的最高敏感度为18 fg,而且不与感染牛的环形泰勒虫、卵形巴贝斯虫、边缘边虫产生交叉反应;所建立的间接ELISA诊断方法对60份被检血清的阳性检出率为70.0%,高于LAT66.7%,显著高于血涂片镜检法43.3%(P<0.01),并且不与感染牛的新孢子虫、附红细胞体、卵形巴贝斯虫、边缘边虫、环形泰勒虫等5种阳性血清发生交叉反应;Western blotting检测结果表明,构建的核酸疫苗质粒pVAX1-P33-P23成功转染到Hela细胞中,并且P33-P23目的基因在其中得到正确表达,表达蛋白具有反应原性,小鼠免疫试验结果表明,所构建的核酸疫苗pVAX1-P33-P23能诱导小鼠产生抗牛瑟氏泰勒虫的特异性体液免疫和细胞免疫应答,并且pVAX1-P33-P23的免疫效果显著优于pVAX1-P33(P<0.05)和pVAX1-P23 (P<0.01)。