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背景:2012年全球胃癌新发95.1万例,死亡72.3万例。2017年《中国胃癌流行病学现状》指出中国胃癌分别占全球胃癌新发病和死亡的42.6%和45.0%。进展期胃癌5年总生存率<30%。联合多个具有相关性的miRNA,可以提高预后准确性,有广阔的实用前景,也为个体化医疗提供了可能。既往研究表明R-flurbiprofen抗肿瘤作用,目前尚没有研究报道Flurbiprofen以及R-flurbiprofen对肿瘤细胞中的miRNA调控,因此检测R-flurbiprofen对肿瘤细胞中miRNA的表达情况,分析R-flurbiprofen通过调控miRNA的表达而调控肿瘤细胞生长、凋亡、迁移和侵袭具有重要意义。目的:(1)脂肪酶催化酯交换反应使(R,S)-flurbiprofen在离子液体中与醇类反应进行立体选择性拆分;探究最佳反应条件,高效环保提纯R-flurbiprofen;(2)确定一种具有预测胃腺癌患者预后能力的miRNA模型;(3)初步验证R-flurbiprofen对GC肿瘤细胞的体外抑制效应和机制与miRNA有关。方法与结果:探索最佳反应组合及条件,(氟比洛芬0.2 mmol),甲醇(2 mmol),脂肪酶(4 mg/mL),离子液体[BMIM][PF6](5 mL),反应温度50℃,脂肪酶催化活性最高(平均酶活性,261.5μmol/g/h;ee值,20.3)。且立体选择性也得到一定提升。且在保证酶催化活性时该体系循环次数可达到六次。采用Chiralpak AD-H型制备色谱柱,在SHIMADZU-8A制备型高效液相色谱仪上分离氟布洛芬。从TCGA数据库下载155名患者和37名对照者的miRNA-seq数据,对microRNA表达谱进行综合分析,并将其用作训练集。采用单变量和多变量Cox回归分析,共鉴定了5个未报道的miRNAs,构建生存预后模型。用其他155名患者作为风险模型评估的验证集。训练集样本依据风险评分系统分为高风险组与低风险组风险组。KM生存曲线高风险组生存时间显著低于低风险组。验证集证明了5-miRNA模型临床预后效能。对临床预后变量的分层分析表明,复发和年龄分别是低风险组和高风险组的重要预后因素。用400μM的R-flurbiprofen药物处理MGC-803胃癌细胞48hr后,药物干预组较对照组比较进行如下实验,CCK-8实验中肿瘤细胞增殖力减弱;ELISA测上清中的IL-1β和TNF-a显著升高;Real-time PCR结果miR-3687,miR-548o,KBTBD11和CAMK1D显著降低;miR-7-2,miR-9-3,miR-1255a,CXCL5,ADPGK,ATM,TRIM66,Bax,Caspase3,Vimentin和N-Cadherin显著升高;KLF12,FRRS1,Bcl-2和E-Cadherin没有差异;Western blot结果Bax和Vimentin显著升高,Caspase3没有差异;细胞侵袭与迁移实验显示细胞侵袭,迁移数量有增加趋势,但是未有显著差异。细胞凋亡实验显示细胞凋亡数量有明显增加。结论:脂肪酶催化的酯交换反应使(R,S)-氟比洛芬在离子液体中与醇类反应进行立体选择性拆分;反应时间为30h时,反应转化率为62%,(S)-氟比洛芬ee值达到99%。基于筛选出未报道的5-miRNAs建立的风险模型在预测胃腺癌患者总生存时间方面表现良好。R-flurbiprofen干预组5-miRNAs及其靶基因变化显著,上调Bax基因及蛋白表达,抑制胃癌细胞增殖,促进其凋亡;5-miRNAs具体调节机制可能通过上调IL-6,IL-1β,TNF-α,CXCL5调控肿瘤细胞免疫,细胞因子细胞因子受体通路;上调Bax,Caspase3促进GC细胞凋亡;上调ADPGK,提示靶向有氧代谢可增加肿瘤细胞对药物敏感性;下调Mir-548o,负反馈上调CXCL5,后续可行miRNA548o及靶基因CXCL5双荧光素酶报告基因证实其对应关系,CXCL5/miRNA敲除,裸鼠荷瘤实验进一步研究胃癌侵袭/转移机制。