论文部分内容阅读
肝细胞癌(Hepatocellular carcinoma, HCC)是世界上最常见的恶性肿瘤,近年来全球HCC发病率正在逐步上升,每年新发HCC病例超过100万,其中约50%发生在中国内地。同时,HCC也是世界第三位常见的肿瘤相关死亡原因,位列我国恶性肿瘤病死率的第二位。目前已知乙(Hepatitis B Virus, HBV)、丙(Hepatitis C Virus, HCV)型肝炎病毒感染、饮酒、暴露于黄曲霉素及氯乙烯是HCC发病的高险因素,但对于HCC发生发展的主要机制尚无明确结论。如何降低HCC逐步上升的高发病率,从而达到预防肝癌的目的仍是目前亟待解决的难题。HCC有一个显著的流行病学特点:肿瘤发生率上的性别差异现象。据统计,全球每年男性HCC发病率约为35.2/10万,女性HCC发病率约为13.3/10万,总体上男女性HCC发病率之比约为2:1~4:1,伴肝硬化的HCC男女发病率之比更是达到11:1。HCC发病率的性别差异现象很早就受到关注,早期研究主要从社会环境因素的角度去解释,如HBV或HCV的男性高感染率、男性饮酒和吸烟率高于女性等,近来遗传与性激素的作用越来越受到重视。关于性激素与HCC发病率的性别差异现象间的关系至今尚无明确结论,分析国内外新近文献得出一个倾向性的结论就是雄激素在促进HCC方面有一定作用,雌激素在抑制HCC方面有一定作用,但其中的具体机制还不清楚。若能在不显著影响患者性功能和第二性征的前提下,利用性激素及其受体的表达变化进行有效的干预从而预防肝癌的发生发展一直是有可能取得突破的研究方向之一。基于上述认识,本研究拟从HCC发病率的性别差异现象这一问题出发,依托课题组先前建立的化学性诱导的高转移炎症相关性SD(Sprague–Dawley, SD)大鼠肝癌模型,探讨性激素对HCC性别差异现象的影响,深入研究二乙基亚硝胺(diethylnitrosamine, DEN)联合N-亚硝基吗啉(N-nitrosomorpholine, NMOR)诱发大鼠形成HCC的雌激素保护作用机制,以期从理论上对肝癌雌激素保护机制有新的认识,为临床上预防HCC发生发展提供治疗靶点和新的方法。本实验首先研究了DEN联合NMOR诱发大鼠形成HCC的肝炎-肝硬化-肝癌三部曲发生过程并采用去势法初步探讨性激素对此过程的影响;之后我们进一步验证了生理性雌激素可能保护HCC发生发展转移的假说;在此基础上,应用酶联免疫吸附测定(Enzyme-linked Immunosorbent Assay, ELISA)、免疫组化(Immunohistochemistry, IHC)、逆转录聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction, RT-PCR)方法从蛋白和基因两个水平检测分析雌激素在保护HCC发生发展过程中差异表达的某些关键生长因子和细胞因子,深入分析DEN联合NMOR诱发肝癌过程中雌激素保护作用的分子机制。实验结果表明:1.本课题组建立的DEN联合NMOR诱发大鼠肝癌模型为典型炎症相关性肝癌模型,符合肝脏炎性病变-肝硬化-肝癌三部曲发展历程,与人类肝癌的自然发生过程相似,是研究肝癌发病原因、癌变过程的良好动物模型。此动物模型再度体现了HCC发病率的性别差异现象并提示雌激素对于HCC的保护作用。2.生理剂量的雌激素能显著抑制化学性诱导的炎症相关性SD大鼠HCC的生成、发展和转移。3.雌激素保护DEN联合NMOR诱导大鼠HCC发生发展的作用机制与改善肝脏及肿瘤炎症微环境有关,通过ERα介导下调HGF和IL-6的转录、表达是其主要的作用方式之一。