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实验目的本研究主要探讨体外survivin小分子干扰RNA(siRNA)对人肝癌细胞株MHCC-97H Survivin基因表达及其增殖和凋亡的影响。体内研究Survivin siRNA对裸鼠肝癌种植瘤Survivin基因表达以及肿瘤生长的影响。实验方法体外实验通过设计、合成针对Survivin基因序列特异性siRNA,用脂质体包裹转染人肝癌细胞株MHCC-97H,实验分为3组：Survivin siRNA转染组(Sur-siRNA组),无关siRNA转染组(NC组)和无转染组(正常对照组)。采用RT-PCR、Western blot技术检测Survivin mRNA及蛋白表达；噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖情况；分别以终浓度为12.5、25.0、50.0nmol/L的siRNA作用于细胞后24 h,采用流式细胞仪AnnexinV/PI双染法检测细胞凋亡。体内实验通过肝癌细胞株构建荷瘤鼠动物模型,将脂质体包裹的Survivin siRNA经静脉注入裸鼠种植瘤体内,以无关siRNA为对照组,观察动物及瘤体的变化,RT-PCR检测瘤组织survivin mRNA水平,Western blot检测瘤组织survivin蛋白表达情况。实验结果体外实验结果显示：转染后48h, Sur-siRNA组、NC组、正常对照组Survivin mRNA表达水平分别为0.55±0.16、0.85±0.28、0.93±0.40,组间比较差异有统计学意义(F=414,P<0.01)。Sur-siRNA组最低,与NC组、正常对照组比较差异均有统计学意义(t=-20.56、-28.37,P均<0.001)。siRNA转染48h后,Si-survivin组、NC组、正常对照组Survivin蛋白的相对表达量分别为0.602±0.005、0.835±0.007、0.993±0.003,组间比较差异有统计学意义(F=238,P<0.01)；Sur-siRNA组蛋白表达水平最低,与NC组、正常对照组差异均有统计学意义(t=-40.17、-66.03,P均<0.001)。转染后72 h和96 h, Si-survivin组细胞抑制率[(19.5+3.6)%、(12.0±0.9)%]显著高于于NC组[(3.6±0.9)%、(-1.3±6.1)%](t=36.18、42.53,P均<0.05)。分别以终浓度为12.5.25.0.50.0nmol/L的siRNA作用于细胞后24 h,12.5、25.0、50.0 nmol/LsiRNA组、NC组和正常对照组细胞凋亡率[分别为(22.64±2.54)%、(35.37±3.28)%、(53.28±4.35)%、(8.77±1.25)%、(9.72±1.37)]比较,差异有统计学意义(F=35.93,P<0.01),而且不同siRNA干扰浓度间凋亡细胞率两两比较,差异有统计学意义(t=-29.73、-38.57,P均<0.001)。荷瘤鼠动物实验发现：Survivin-siRNA注射组(SU-IV组)在注射后10天肿瘤体积较对照组明显缩小,差异有统计学意义(P<0.05)。SU-IV组survivin mRNA及蛋白表达水平低于对照组(P<0.001)。结论脂质体包裹的Survivin特异性siRNA能抑制人肝癌细胞株MHCC-97H Survivin基因表达,抑制细胞增殖,促进细胞凋亡。Survivin siRNA纳米脂质体抑制裸鼠肝癌种植瘤的生长,下调瘤组织Survivin mRNA及蛋白表达。