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目的： 通过TGF-β1体外刺激人肾小管上皮细胞（HK-2细胞）建立肾间质纤维化细胞模型，探讨:(1) NCTD是否通过靶向抑制PP2Ac发挥抗肾间质纤维化作用;(2) NCTD抗肾间质纤维化是否与其抑制PP2Ac介导Smad3-L区去磷酸化有关。 方法： 1、常规培养HK-2细胞，分别通过过表达PP2Ac和小干扰RNA敲低PP2Ac表达后，应用TGF-β1(5ng/ml)刺激和NCTD(2.5μg/ml)进行干预24h。采用RT-PCR和Western印迹法检测PP2Ac、FN、Col-Ⅰ、α-SMA和E-cadherin mRNA及蛋白表达水平。 2、常规培养HK-2细胞，应用NCTD(2.5μg/ml)进行预干预24h和TGF-β1(5ng/ml)刺激1h。采用间接细胞免疫荧光法检测pSmad3-L(Ser204)、pSmad3-L(Ser208)在细胞的分布，Western印迹法检测总蛋白中PP2Ac和核蛋白中pSmad3-L(Ser204)、pSmad3-L(Ser208)的表达。 结果： 1、TGF-β1刺激HK-2细胞24h致PP2Ac表达上调的同时，FN、Col-Ⅰ和α-SMA表达上调，E-cadherin表达下调，HK-2细胞纤维化加重;而转染PP2Ac过表达质粒后再用TGF-β1刺激，则PP2Ac表达上调更为明显，HK-2细胞纤维化加重更显著;NCTD干预使PP2Ac表达下调，同时FN、Col-Ⅰ和α-SMA表达下调，E-cadherin表达上调，HK-2细胞纤维化缓解; 2、小干扰RNA敲低PP2Ac表达后，FN、Col-Ⅰ和α-SMA表达下调，E-cadherin表达上调，HK-2细胞纤维化缓解;而NCTD与小干扰RNA共同抑制PP2Ac表达后，对HK-2细胞纤维化的缓解程度同单纯PP2Ac小干扰RNA干预组比较无明显差异; 3、免疫荧光结果显示，空白对照组中pSmad3-L(Ser204)、pSmad3-L(Ser208)基本无表达，TGF-β1刺激HK-2细胞1h后pSmad3-L(Ser204)、pSmad3-L(Ser208)在细胞核内表达明显增多，NCTD干预使pSmad3-L(Ser204)、pSmad3-L(Ser208)在细胞核内表达进一步增多。Western印迹结果显示，TGF-β1刺激1h使得PP2Ac蛋白表达上调的同时，细胞核内pSmad3-L(Ser204)、pSmad3-L(Ser208)蛋白表达均增多，NCTD干预使PP2Ac表达下调的同时，细胞核内pSmad3-L(Ser204)、pSmad3-L(Ser208)蛋白表达进一步增多。 结论： 1.NCTD靶向抑制PP2Ac发挥抗肾间质纤维化作用; 2.NCTD可能通过抑制PP2Ac介导Smad3-L区去磷酸化，即促进Smad3-L区磷酸化发挥抗肾间质纤维化作用。