瓜实蝇Bactrocera cucurbitae(Copuillett)隶属双翅目 Diptera,实蝇科 Tephritidae,果实蝇属Bactrocera Macquar,其繁殖力强,寄生范围广,主要为害葫芦科和茄科植物,已成为世界农业生产上的重要害虫之一。性别决定是影响瓜实蝇生殖、发育的关键因素。transformer(tra)是很多昆虫性别决定中的一个关键基因,特别是在双翅目昆虫中。但迄今为止瓜实蝇性别决定的分子机制尚未不清楚,而且瓜实蝇的transformer尚未得到鉴定。本次研究以瓜实蝇为试验材料,利用RT-PCR结合RACE技术,分离瓜实蝇tra(Bcutra)基因,采用半定量RT-PCR方法研究tra基因在瓜实蝇不同发育时期的表达情况,研究该基因在瓜实蝇性别决定中的可能作用,利用CRISPR/Cas9技术敲除瓜实蝇tra基因,为防治瓜实蝇提供新思路、新方法。在这项研究中,我们从瓜实蝇tra基因中分离和鉴定得到一个雌性特异转录本和二个雄性特异转录本,Bcutra基因的结构已经被确定,并且已经发现在Bcutra中存在多个保守的TRA/TRA-2结合位点。BcuTRA与其他果实蝇科的TRA蛋白高度保守。通过对Bcutra在不同发育时期的基因表达分析表明,Bcutra的雌性转录本比雄性转录本出现更早,这表明母系TRA在卵中是遗传的,并且可能在TRA的表达中起调节作用。Bcutra中蛋白质序列的保守性和性别基因的特异性剪接及其在发育过程中的表达模式表明,Bcutra可能是实蝇科的性别决定的主要基因。目前我们已经鉴定了瓜实蝇tra基因,并体外合成了 Cas9mRNA和sgRNA mRNA,为下一步敲除Bcutra基因提供理论基础,以达到将来发展生物工程方法防治瓜实蝇及其他害虫的目的。