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目的:检测GRIM-19蛋白在上尿路上皮癌组织(UTUC)组织和对应的非癌组织中表达情况，寻找差异，探讨GRIM-19蛋白在UTUC中的临床意义。通过分析术前中性粒细胞与淋巴细胞的比值(NLR)，寻找其与UTUC临床分级、分期及预后的关系，探讨其临床意义。
方法:选择大连医科大学附属第二医院自2008年01月至2017年12月70例上尿路上皮癌患者的相关资料。对病理组织样本，用免疫组织化学(IHC)的方法检测UTUC组织及对应正常尿路上皮组织中GRIM-19的表达水平，计算血中中性粒细胞与淋巴细胞比值。统计分析患者资料，明确GRIM-19蛋白在UTUC中表达情况。分析GRIM-19和NLR的比值与临床指标的关系，寻找两者在UTUC中的临床意义，分析患者无病生存期(DFS)和总生存期(OS)的相关因素。
结果:
1.GRIM-19表达及NLR情况
1.1GRIM-19表达情况
在70例UTUC患者中，阴性表达2例，弱阳性表达26例，共占40％，阳性表达有34例，强阳性表达8例，共占60％。将阴性(-)和弱阳性(+)定义为GRIM-19低表达，评分为(0-4分);将中阳性(++)和强阳性(+++)定义为GRIM-19高表达，评分为6-12分。GRIM-19高表达42例，高表达率为60.0％。在55例正常上尿路上皮组织中均为高表达，高表达率为100％，两者高表达率差别有统计学意义(p＜0.05)。
1.2中性粒细胞与淋巴细胞比值(NLR)表达情况
70例患者中NLR求其均值为3.58，标准差为2.86，NLR的25％、50％及75％值分别为:1.7508，2.6299，4.7669。根据随访结束时，患者肿瘤特异性生存或死亡结果，绘制ROC曲线，计算约登指数，NLR=4.079时ROC的曲线下面积最大。数值为0.645(95％CI0.496～0.798，约登指数=0.385，敏感性=61.9％，特异性=76.6％，p=0.052)。因此确定NLR=4.079为最佳临界值，将NLR＜4.079者定义为低NLR组，NLR＞4.079者为高NLR组。70例中，低值NLR组44例，高值NLR组34例。术前无血常规资料者2人。
2.GRIM-19表达及NLR与各数据关系
2.1GRIM-19的表达与临床、病理特征之间的关系
根据GRIM-19评分情况，分析结果为GRIM-19表达与NLR相关，与肿瘤分级、pT分期有关，与术后有无转移情况相关，差异有统计学意义(p＜0.05)。GRIM-19表达高低与年龄，性别，肿瘤脉管癌栓，肿瘤部位，术后复发情况，肿瘤侧别均不相关，不具备统计学意义(p＞0.05)
2.2中性粒/淋巴细胞比值(NLR)与临床数据关系
根据随访结束时患者肿瘤特异性生存或死亡结果绘制ROC曲线，NLR=4.079时ROC的曲线下面积最大。数值为0.652(95％CI0.512～0.793，约登指数=0.36，敏感性=54.2％，特异性=81.8％，p=0.039)。因此确定NLR=4.079为最佳临界值，将NLR＜4.079者定义为低NLR组，NLR＞4.079者为高NLR组。
不同组间的NLR值比较，结果显示为:NLR表达与肿瘤分级、pT分期、术后复发及GRIM-19的表达相关，差异有统计学意义(p＜0.05)。NLR表达与年龄，性别，肿瘤部位，肿瘤侧别，肿瘤大小，肿瘤脉管癌栓关系未见相关性，无统计学意义(p＞0.05)。
2.3NLR与癌中GRIM-19表达情况关系
在70例UTUC患者中，低NLR者51例，比例为72.9％。高NLR者17例，比例为24.3％，2例无血常规，资料缺失。将70例患者的NLR原始数据与70例患者癌中GRIM-19评分作两变量相关性分析Kendallstau_b检验相关系数为r=-0.181，p=0.050;Spearman相关系数为r=-0.244，p=0.045;将70例患者的NLR值与70例患者癌中GRIM-19表达高低作两变量相关性分析Kendallstaub检验相关系数为r=-0.295，p=0.016，Spearman相关系数为r=-0.295，p=0.015，两者相关性明显(p＜0.05)
3.UTUC预后分析
3.1与患者DFS的分析
将70例患者的资料与DFS进行分析。Kaplan-Meier法，进行单因素分析，各数据组间比较采用Log-rank检验。结果显示:GRIM-19表达高低与DFS相关，NLR表达高低与DFS相关，pT分期与DFS相关，病理分级与DFS相关，统计分析有意义(p＜0.05)。资料中只有1例患者明确有神经侵犯，其余均无神经侵犯，故未做单因素分析。确诊时年龄、性别、肿瘤部位、肿瘤侧别，肿瘤大小，脉管癌栓与上尿路上皮癌患者术后DFS无明显相关性(p＞0.05)。
进一步采用Cox回归模型进行多因素分析。70例患者中GRIM-19表达高低、NLR，年龄分组，性别，肾盂、输尿管位置，左右侧，肿瘤大小，病理分级、临床分期，LVSI，神经侵犯对患者DFS的影响，结果显示GRIM-19表达高低、神经是否有侵犯及病理分级与70例患者DFS的预后因素相关(p＜0.05)。NLR高低分组未见明显相关。
3.2与OS的分析
对患者的临床、病理资料与OS进行分析。Kaplan-Meier法单因素分析结果为:GRIM-19的表达、NLR、肿瘤pT分期、肿瘤分级、局部复发情况，是否转移与患者OS相关性明显(p＜0.05)。患者年龄，性别，部位，左右侧，肿瘤大小，是否有脉管癌栓与OS未见明显相关性(p＞0.05)。采用Cox回归模型进行多因素分析。多因素包括:GRIM-19表达高低、NLR高低、年龄分组、性别、肾盂或输尿管位置、左右侧、肿瘤大小、病理分级、临床分期、LVSI、神经侵犯、是否有复发、是否有远处转移。进行多因素分析结果显示:GRIM-19表达高低、NLR、分级、神经是否侵犯及是否发生远处转移与OS预后因素相关(p＜0.05)。其余因素未见明显相关。
结论:
1、GRIM-19在癌旁正常组织中高表达，在UTUC组织中低表达，提示GRIM-19可能成为UTUC的潜在的肿瘤标志物。
2、在相关临床资料分析中，GRIM-19的低表达和NLR高表达与肿瘤分期、分级相关，提示GRIM-19低表达与肿瘤的恶性程度及侵袭能力有关;高NLR提示UTUC的肿瘤分级高、分期晚及术后易出现膀胱复发，二者结合可作为UTUC生物学行为的预测指标。
3、单因素分析中GRIM-19表达、NLR、肿瘤分级、pT分期与DFS及OS有关，多因素分析中GRIM-19、肿瘤分级及神经侵犯对DFS及OS的相关明显，是UTUC患者预测预后的指标。
方法:选择大连医科大学附属第二医院自2008年01月至2017年12月70例上尿路上皮癌患者的相关资料。对病理组织样本，用免疫组织化学(IHC)的方法检测UTUC组织及对应正常尿路上皮组织中GRIM-19的表达水平，计算血中中性粒细胞与淋巴细胞比值。统计分析患者资料，明确GRIM-19蛋白在UTUC中表达情况。分析GRIM-19和NLR的比值与临床指标的关系，寻找两者在UTUC中的临床意义，分析患者无病生存期(DFS)和总生存期(OS)的相关因素。
结果:
1.GRIM-19表达及NLR情况
1.1GRIM-19表达情况
在70例UTUC患者中，阴性表达2例，弱阳性表达26例，共占40％，阳性表达有34例，强阳性表达8例，共占60％。将阴性(-)和弱阳性(+)定义为GRIM-19低表达，评分为(0-4分);将中阳性(++)和强阳性(+++)定义为GRIM-19高表达，评分为6-12分。GRIM-19高表达42例，高表达率为60.0％。在55例正常上尿路上皮组织中均为高表达，高表达率为100％，两者高表达率差别有统计学意义(p＜0.05)。
1.2中性粒细胞与淋巴细胞比值(NLR)表达情况
70例患者中NLR求其均值为3.58，标准差为2.86，NLR的25％、50％及75％值分别为:1.7508，2.6299，4.7669。根据随访结束时，患者肿瘤特异性生存或死亡结果，绘制ROC曲线，计算约登指数，NLR=4.079时ROC的曲线下面积最大。数值为0.645(95％CI0.496～0.798，约登指数=0.385，敏感性=61.9％，特异性=76.6％，p=0.052)。因此确定NLR=4.079为最佳临界值，将NLR＜4.079者定义为低NLR组，NLR＞4.079者为高NLR组。70例中，低值NLR组44例，高值NLR组34例。术前无血常规资料者2人。
2.GRIM-19表达及NLR与各数据关系
2.1GRIM-19的表达与临床、病理特征之间的关系
根据GRIM-19评分情况，分析结果为GRIM-19表达与NLR相关，与肿瘤分级、pT分期有关，与术后有无转移情况相关，差异有统计学意义(p＜0.05)。GRIM-19表达高低与年龄，性别，肿瘤脉管癌栓，肿瘤部位，术后复发情况，肿瘤侧别均不相关，不具备统计学意义(p＞0.05)
2.2中性粒/淋巴细胞比值(NLR)与临床数据关系
根据随访结束时患者肿瘤特异性生存或死亡结果绘制ROC曲线，NLR=4.079时ROC的曲线下面积最大。数值为0.652(95％CI0.512～0.793，约登指数=0.36，敏感性=54.2％，特异性=81.8％，p=0.039)。因此确定NLR=4.079为最佳临界值，将NLR＜4.079者定义为低NLR组，NLR＞4.079者为高NLR组。
不同组间的NLR值比较，结果显示为:NLR表达与肿瘤分级、pT分期、术后复发及GRIM-19的表达相关，差异有统计学意义(p＜0.05)。NLR表达与年龄，性别，肿瘤部位，肿瘤侧别，肿瘤大小，肿瘤脉管癌栓关系未见相关性，无统计学意义(p＞0.05)。
2.3NLR与癌中GRIM-19表达情况关系
在70例UTUC患者中，低NLR者51例，比例为72.9％。高NLR者17例，比例为24.3％，2例无血常规，资料缺失。将70例患者的NLR原始数据与70例患者癌中GRIM-19评分作两变量相关性分析Kendallstau_b检验相关系数为r=-0.181，p=0.050;Spearman相关系数为r=-0.244，p=0.045;将70例患者的NLR值与70例患者癌中GRIM-19表达高低作两变量相关性分析Kendallstaub检验相关系数为r=-0.295，p=0.016，Spearman相关系数为r=-0.295，p=0.015，两者相关性明显(p＜0.05)
3.UTUC预后分析
3.1与患者DFS的分析
将70例患者的资料与DFS进行分析。Kaplan-Meier法，进行单因素分析，各数据组间比较采用Log-rank检验。结果显示:GRIM-19表达高低与DFS相关，NLR表达高低与DFS相关，pT分期与DFS相关，病理分级与DFS相关，统计分析有意义(p＜0.05)。资料中只有1例患者明确有神经侵犯，其余均无神经侵犯，故未做单因素分析。确诊时年龄、性别、肿瘤部位、肿瘤侧别，肿瘤大小，脉管癌栓与上尿路上皮癌患者术后DFS无明显相关性(p＞0.05)。
进一步采用Cox回归模型进行多因素分析。70例患者中GRIM-19表达高低、NLR，年龄分组，性别，肾盂、输尿管位置，左右侧，肿瘤大小，病理分级、临床分期，LVSI，神经侵犯对患者DFS的影响，结果显示GRIM-19表达高低、神经是否有侵犯及病理分级与70例患者DFS的预后因素相关(p＜0.05)。NLR高低分组未见明显相关。
3.2与OS的分析
对患者的临床、病理资料与OS进行分析。Kaplan-Meier法单因素分析结果为:GRIM-19的表达、NLR、肿瘤pT分期、肿瘤分级、局部复发情况，是否转移与患者OS相关性明显(p＜0.05)。患者年龄，性别，部位，左右侧，肿瘤大小，是否有脉管癌栓与OS未见明显相关性(p＞0.05)。采用Cox回归模型进行多因素分析。多因素包括:GRIM-19表达高低、NLR高低、年龄分组、性别、肾盂或输尿管位置、左右侧、肿瘤大小、病理分级、临床分期、LVSI、神经侵犯、是否有复发、是否有远处转移。进行多因素分析结果显示:GRIM-19表达高低、NLR、分级、神经是否侵犯及是否发生远处转移与OS预后因素相关(p＜0.05)。其余因素未见明显相关。
结论:
1、GRIM-19在癌旁正常组织中高表达，在UTUC组织中低表达，提示GRIM-19可能成为UTUC的潜在的肿瘤标志物。
2、在相关临床资料分析中，GRIM-19的低表达和NLR高表达与肿瘤分期、分级相关，提示GRIM-19低表达与肿瘤的恶性程度及侵袭能力有关;高NLR提示UTUC的肿瘤分级高、分期晚及术后易出现膀胱复发，二者结合可作为UTUC生物学行为的预测指标。
3、单因素分析中GRIM-19表达、NLR、肿瘤分级、pT分期与DFS及OS有关，多因素分析中GRIM-19、肿瘤分级及神经侵犯对DFS及OS的相关明显，是UTUC患者预测预后的指标。