六神曲以面粉麦麸为发酵基质,加入苦杏仁、赤小豆,以青蒿、辣蓼、苍耳草煎煮的汁液混匀后发酵而成。目前六神曲各地发酵工艺、炮制工艺存在较大差异,并没有统一的质量标准。本实验在《部颁标准》的基础上,对六神曲制备工艺进行了量化研究,确定六神曲最佳制备工艺,为后期六神曲系统研究打下基础。本文对六神曲发酵前原料处理、发酵周期、原料药鲜干品入药进行了比较研究。结果优化软材制作工艺为,六神曲七味原料药,赤小豆、苦杏仁混匀后粉碎成粗粉(过2号筛),与麦麸、面粉均匀混合;取青蒿、辣蓼、苍耳草加12倍量水,浸泡30分钟,煎煮1小时,用200目滤布板框滤过,滤液浓缩成清膏(原生药6.5倍量水),趁热与上述药粉拌匀。发酵周期以3-4天为宜,且鲜品入药具有抑制黑霉等杂菌的作用。本文对先六神曲化学成分进行了系统预试,结果显示六神曲中主要含有脂肪油、氨基酸、鞣质及黄酮类等。此外,借助GC-MS技术对六神曲发酵前后化学成分变化进行比较研究,发酵后挥发性成分种类大量增加,以棕榈酸乙酯、油酸乙酯、亚油酸乙酯为主的酯类化合物可能是六神曲特异性气味的来源。实验在已知味道差异的雪胆分析基础上,建立了有效鉴别存在味觉差异的样品的电子舌方法,并在此基础上探索了电子舌技术能否用于六神曲发酵前后味觉差异。结果发现,六神曲发酵前后味道存在差异,但是PCA分析差异并不显著(PC1=67.899%,PC2=27.112%和PC3=4.063%)。电子舌技术能否应用于六神曲的鉴别有待于进一步验证。对六神曲进行药效学研究,通过小鼠肠推进胃排空验证了六神曲促进消化的作用。在此基础上,通过构建食积模型,对小鼠血清激素进行判断,以及对豚鼠肠肌张力等实验,发现了六神曲有效部位为正丁醇部位。结果显示六神曲不能恢复苯海拉明导致的肠肌运动阻断现象,但能够恢复甲磺酸酚妥拉明、硫酸阿托品、盐酸昂丹司琼及盐酸普萘洛尔导致的肠肌运动阻断现象,同时通过促进胃泌素的分泌,抑制神经递质胆碱酯酶和血清NO的分泌从而调节肠胃活动,起到消食调中的作用。借助16s片段高通量测序对六神曲对食积模型小鼠肠道菌群的影响发现,六神曲可以显著改善食积造成的肠道菌群紊乱状况,这是六神曲消食化积的重要理论依据。借助16s片段及ITS片段高通量测序对六神曲微生物多样性检测发现,对细菌分析来看,对在门的水平上,六神曲中变形杆菌门和厚壁杆菌门总含量均超过97%,真菌Mucoromycota(毛菌亚门)和子囊菌门总含量超过98%。毛霉菌是六神曲产生白色菌衣的主要来源,Klebsiella aerogenes、Pediococcus pentosaceus、Bacillus subtilis、Lichtheimia corymbifera、Aspergillus flavus、Aspergillus penicillioides、Pichia barkeri应当是六神曲中有益于发酵的优势菌种。在此基础上对六神曲进行纯种发酵研究。研究发现,枯草芽孢杆菌纯种发酵无论从芳香气味,还是药效作用及有益类成分含量,均表现最优。综上,同时发现了六神曲有效部位为正丁醇部位。六神曲不能恢复苯海拉明导致的肠肌运动阻断现象,但能够恢复甲磺酸酚妥拉明、硫酸阿托品、盐酸昂丹司琼及盐酸普萘洛尔导致的肠肌运动阻断现象,同时通过促进胃泌素的分泌,抑制神经递质胆碱酯酶和血清NO的分泌从而调节肠胃活动,起到消食调中的作用。同时六神曲可以显著改善食积造成的肠道菌群紊乱状况。六神曲纯种发酵最佳菌种为枯草芽孢杆菌,但是仍需进一步研究验证。