【摘 要】
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目的:探讨核因子-κB（Nuclear factor-κB,NF-κB）经过不同浓度白细胞介素-33（Interleukin-33,IL-33）影响后对人肝癌Huh-7细胞的侵袭、凋亡影响。方法:（1）体外培养人肝癌Huh-7细胞,将处于对数生长期的Huh-7细胞随机分为5组,分别为:（1）空白对照组（37℃、5%CO2培养箱中培养）、（2）20ng/L组（加入IL-33,终浓度为20ng/L）、
【基金项目】
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百色市科学研究与技术开发计划课题（百科计20170810）,基于IL-33/ST2L探讨NF-κB信号通路在肝癌发生发展中的分子作用机制；
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目的:探讨核因子-κB（Nuclear factor-κB,NF-κB）经过不同浓度白细胞介素-33（Interleukin-33,IL-33）影响后对人肝癌Huh-7细胞的侵袭、凋亡影响。方法:（1）体外培养人肝癌Huh-7细胞,将处于对数生长期的Huh-7细胞随机分为5组,分别为:（1）空白对照组（37℃、5%CO2培养箱中培养）、（2）20ng/L组（加入IL-33,终浓度为20ng/L）、（3）40ng/L组（加入IL-33,终浓度为40ng/L）、（4）60ng/L组（加入IL-33,终浓度为60ng/L）、（5）ant-ST2L组（加入ST2L拮抗剂,终浓度为10ng/m L）;（2）采用Transwell侵袭实验检测不同浓度IL-33及ST2L拮抗剂处理24h后对人肝癌Huh-7细胞侵袭的影响,检测各组进入到小室下层膜的细胞;（3）采用流式细胞术检测不同浓度IL-33及ST2L拮抗剂处理24h后对人肝癌Huh-7细胞凋亡的影响,检测各组细胞凋亡数目;（4）采用q RT-PCR检测不同浓度IL-33及ST2L拮抗剂处理24h后对人肝癌Huh-7细胞NF-κBm RNA表达的影响,检测各组细胞NF-κB m RNA表达量;（5）采用Westen blot检测不同浓度IL-33及ST2L拮抗剂处理24h后对人肝癌Huh-7细胞NF-κB蛋白表达的影响,检测各组细胞NF-κB蛋白表达量。（6）各实验结果数据收集整理后使用SPSS26.0统计学软件进行分析,用均数±标准差（mean±SD）表示计量资料,采用独立样本t检验比较两组间实验数据,使用单因素方差分析（One-way ANOVA）比较多个样本均数间,相关性分析采用Spearman秩相关性分析,以P<0.05表示差异有统计学意义。结果:（1）Transwell侵袭实验显示,经IL-33（20ng/L、40ng/L、60ng/L）处理后,细胞侵袭数显著低于对照组,并且随着IL-33浓度的提高,细胞侵袭数量减少（P<0.01）,而经ST2L拮抗剂处理后,细胞侵袭数显著高于对照组（P<0.01）;（2）凋亡实验显示,IL-33不同浓度组干预后细胞凋亡率明显降低（P<0.05或P<0.01）,并且凋亡率随着IL-33作用浓度的增高而降低,ST2L拮抗剂组干预后细胞凋亡率明显升高（P<0.01）;（3）q RT-PCR分析显示,经IL-33（20ng/L、40ng/L、60ng/L）处理后,NF-κBp65的m RNA表达与对照组相比明显上调（P<0.01）,经ST2L拮抗剂处理后,NF-κBp65的m RNA表达与对照组相比明显下调（P<0.01）;（4）Westen blot实验结果显示,经IL-33（20ng/L、40ng/L、60ng/L）处理后,NF-κBp65的蛋白表达与对照组相比明显增加（P<0.01）,而经ST2L拮抗剂处理后,NF-κBp65的蛋白表达与对照组相比明显降低。结论:（1）IL-33能明显降低人肝癌Huh-7细胞的侵袭能力,并抑制其凋亡,且呈剂量依赖性。（2）IL-33可使人肝癌Huh-7细胞中NF-κBp65的m RNA及蛋白表达增加。（3）IL-33可能通过结合ST2L,激活NF-κB通路,抑制人肝癌Huh-7细胞的侵袭和凋亡。
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