背景类风湿关节炎(Rheumatoid Arthritis,RA)是一种以关节滑膜炎症为特点的慢性自身免疫性疾病,主要病变部位是手、脚小关节,可导致关节功能丧失和残疾,严重危及患者的生活质量甚至生命。由于RA发病机制非常复杂,至今尚未完全阐明,其重要的病理学特征是关节滑膜的持续性增生和软骨及骨的破坏。艾灸已经运用到治疗类风湿关节炎中,用于抑制关节炎症、缓解疼痛和提高个人日常活动能力。经过统计学分析,每一个病种都可以找到最合适的艾灸治疗持续时间长度,即最佳灸量。本研究的目的就是寻找艾灸治疗类风湿关节炎的最佳灸量,通过灸量的标准化研究,简化临床操作程序,降低误差,提高艾灸治疗类风湿关节炎的疗效。目的通过比较不同艾灸治疗持续时间对类风湿关节炎大鼠作用效果的影响,寻找艾灸治疗RA的最佳灸量,了解灸量与灸效的关系,推动艾灸治疗的规范化发展,促进艾灸操作的不断完善。方法(1)将40只雄性SD(SpragueDawley)大鼠随机选取8只作为空白对照组,其他32只大鼠建立Ⅱ型胶原诱导(Collagen-Induced Arthritis,CIA)的大鼠关节炎模型。造模成功后,32只大鼠随机分为模型组、艾灸20分钟组、艾灸40分钟组、艾灸60分钟组,每组8只大鼠。在艾灸20分钟组、艾灸40分钟组和艾灸60分钟组,艾灸肾俞、足三里穴分别20分钟、40分钟和60分钟。6天为一个疗程,疗程间休息一天,共治疗三个疗程,即艾灸干预18天。(2)各组大鼠基线比较:比较各组大鼠体重、足趾容积大小。(3)一般情况的比较:比较各组大鼠艾灸前、艾灸3周一般情况。(4)体重:比较各组大鼠艾灸前、艾灸3周体重变化。(5)足趾容积测定:比较各组大鼠艾灸前、艾灸3周足趾容积的变化。(6)关节炎指数评分:观察各组大鼠艾灸前、艾灸3周大鼠关节炎指数(Arthritis Index,AI)评分,空白对照组不进行评分。(7)炎症因子:艾灸3周后,比较各组大鼠的血清白介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平。(8)滑膜组织病理学改变:艾灸3周后,收集空白对照组、模型组、艾灸20分钟组组、艾灸40分钟组、艾灸60分钟组每组两只大鼠的一侧踝关节滑膜组织病理标本,观察并比较每组大鼠滑膜组织病理学改变。(9)采用单因素方差分析(One-way ANOVA)分析数据,得出艾灸治疗RA最佳持续时间。结果(1)基线比较:大鼠CIA造模前,各组大鼠体重、足趾容积大小无明显统计学差异(P>0.05)。(2)一般情况:CIA造模前,各组大鼠一般情况良好;造模后,模型组、艾灸20分钟组、艾灸40分钟组、艾灸60分钟组大鼠出现不同程度关节红肿;艾灸干预3周后,模型组大鼠关节症状持续加重,关节红肿明显,出现跛行现象,活动量减少;艾灸20分钟组、艾灸60分钟组大鼠活动尚可,关节红肿相对减轻,稍跛行;艾灸40分钟组大鼠关节肿胀改善比较明显,关节红肿明显减轻,活动力良好;空白对照组大鼠表现正常,无关节红肿现象。(3)体重比较:艾灸干预前,比较各组大鼠体重变化,无统计学差异,P>0.05,具有可比性。艾灸3周,模型组、艾灸20分钟组、艾灸40分钟组、艾灸60分钟组分别与空白对照组大鼠比较体重,空白对照组大鼠体重持续增加且较明显,模型组以及各艾灸组大鼠体重明显低于空白对照组,P<0.05,差异有统计学意义。分别比较艾灸组各组与模型组大鼠体重变化,模型组大鼠体重明显低于艾灸组各组,P<0.05,有统计学意义。艾灸组各组体重相比较,P>0.05,无统计学差异。(4)足趾容积比较:艾灸干预前,模型组、艾灸组各组分别与空白对照组比较,大鼠足趾容积增加,P<0.05,有统计学差异;艾灸组各组与模型组大鼠足趾容积相比,P>0.05,差异无统计学意义,说明具有可比性。艾灸3周,与模型组相比,艾灸各组艾灸20分钟组、艾灸40分钟组、艾灸60分钟组足趾容积大小显著降低(P<0.01),艾灸40分钟组与空白对照组对比无统计学差异(P>0.05),艾灸40分钟组大鼠足趾容积大小几乎达到空白对照组的水平。与艾灸20分钟组、艾灸60分钟组两组相比,艾灸40分钟组足趾容积降低(P<0.05),但艾灸20分钟组与艾灸60分钟组比较无统计学差异(P>0.05)。本研究表明艾灸40分钟组减轻大鼠足趾容积肿胀度的效果优于艾灸20分钟组和艾灸60分钟组。(5)比较关节炎指数评分:艾灸干预前,模型组与艾灸组各组AI评分得分均大于4分,即造模成功,模型组与艾灸组各组AI评分相比P>0.05,差异无统计学意义,说明具有可比性。艾灸3周后,与模型组相比,艾灸20分钟组、艾灸40分钟组、艾灸60分钟组明显降低了大鼠关节炎指数评分(P<0.01)。与艾灸20分钟组、艾灸60分钟组相比,艾灸40分钟组关节炎指数评分有显著的统计学差异(P<0.01),而艾灸20分钟组、艾灸60分钟组相比差异无统计学意义(P>0.05),数据显示在减轻关节炎指数评分上艾灸40分钟组优于艾灸20分钟组、艾灸60分钟组。(6)炎症因子IL-1β和TNF-α水平:艾灸3周后,与空白对照组相比,模型组血清IL-1β和TNF-α(P<0.01)显著增加。和模型组相比,艾灸20分钟组、艾灸40分钟组和艾灸60分钟组均可降低大鼠血清1L-1β和TNF-α水平(P<0.05)。与艾灸20分钟组、艾灸60分钟组两组相比,艾灸40分钟组有统计学差异(P<0.05),艾灸40分钟组大鼠血清IL-1β和TNF-α数值下降明显,因此艾灸40分钟组的效果优于艾灸20分钟组和艾灸60分钟组,可以有效的降低血清中IL-1β和TNF-α水平。而艾灸20分钟组和艾灸60分钟组该两组相比,血清中IL-1β和TNF-α数值变化无统计学差异(P>0.05)。(7)滑膜组织病理学改变:艾灸3周后,观察各组滑膜组织病理学改变,空白对照组CIA大鼠滑膜炎症病理学可见囊腔光滑,表面覆有薄层透明软骨,软骨无退行性病变,关节滑膜细胞排列规则、连续平整、结构层次清晰,无炎症细胞浸润,未见滑膜肿胀、组织坏死。模型组大鼠滑膜炎症病理学可见重度充血水肿、滑膜重度肿胀、大量的炎症细胞浸润以及中度组织坏死。艾灸20分钟组滑膜炎症病理学可见轻度滑膜肿胀,轻度充血水肿,滑膜细胞轻度增生,并可见少量炎症细胞浸润。艾灸40分钟组滑膜炎症病理学可见关节滑膜细胞连续平整、结构层次清晰,未见组织坏死、炎细胞浸润,关节滑膜可见轻度充血水肿。艾灸60分钟组滑膜炎症病理学可见关节滑膜轻度充血水肿,滑膜细胞轻度增生,滑膜轻度肿胀。艾灸20分钟组、艾灸40分钟组和艾灸60分钟组滑膜炎症病理学比模型组大鼠滑膜炎症病理学有所改善,而艾灸40分钟组的滑膜炎症病理改善显著。结论(1)经过3周艾灸,艾灸组各组与模型组比较,大鼠的一般情况改善,体重增加,足趾容积减小,AI评分降低,血清IL-1β、TNF-α水平均低于模型组,踝关节病理显示滑膜变薄、炎细胞轻度浸润。证明艾灸治疗在改善CIA大鼠关节红肿、减轻炎症反应和调节免疫方面具有一定的治疗效果。(2)艾灸40分钟治疗CIA大鼠的作用效果比艾灸20分钟及艾灸60分钟的作用效果更加明显。(3)不同持续时间艾灸治疗CIA大鼠均有明显的作用效果,且以艾灸40分钟的作用效果最为显著。本实验研究结果为临床艾灸治疗RA的持续时间提供重要的参考和借鉴,以此提高临床艾灸治疗RA的疗效。