【摘 要】
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乙酰辅酶A羧化酶（Acetyl-CoA Carboxylase,ACC,EC 6.4.1.2）催化依赖于ATP的乙酰辅酶A羧化形成丙二酸单酰辅酶A,该反应是脂肪酸生物合成途径中的第一步,也是受到关键调控的一步.
【出 处】
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中国科学院研究生院 中国科学院大学
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乙酰辅酶A羧化酶（Acetyl-CoA Carboxylase,ACC,EC 6.4.1.2）催化依赖于ATP的乙酰辅酶A羧化形成丙二酸单酰辅酶A,该反应是脂肪酸生物合成途径中的第一步,也是受到关键调控的一步.根据结核分枝杆菌、麻风分枝杆菌和天蓝色链霉菌中生物素羧基载体蛋白的氨基酸保守序列以及地中海拟无枝菌酸菌U32对氨基酸密码子的使用偏好,设计一对简并引物,从U32总染色体上扩增出一条约250bp的片段,并以此片段为探针成功地从U32基因组cosmid文库中克隆到相应的乙酰辅酶A羧化酶生物素羧基载体蛋白亚单位（AccA）的编码基因αccA.该基因对应的ORF长1797bp,编码一个598个氨基酸的蛋白,推算出的分子量是63.714Da;基因G+C含量为70.1﹪,符合U32基因结构特征;距起始密码子GTG上游6个碱基处有链霉菌典型的核糖体结合序列（RBS）AGGAGG;并在蛋白的N端找到生物素羧化酶特征的ATP结合区.利用pET28（b）系统构建有达载体,在E.ColiBL21（DE3）中实现αccA的诱导表达,产物大部分处于上清中,并已通过Western Blot证明该蛋白上确有共价结合的生物素.Northern Blot研究了五种不同氮源对αccA基因转录水平的影响.
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