“毒邪”理论是中医药基础理论的重要组成部分，尤其在传染性疾病、疑难病的诊治中，多从“毒邪”理论入手，提出相应的治疗措施。本课题组在前期研究中，基于流行病学的调查及大量临床经验，提出肝纤维化的基本病机是“正气亏虚，络脉瘀阻”，其病理损伤的启动因素和持续状态的关键环节是“毒损肝络”，也是慢性肝病持续性加重的根本原因。既往的研究基于这一病机假设，制定了治疗方“芪术颗粒”，临床和基础研究均提示，该认识符合肝纤维化的病机特点。但就“毒损肝络”的作用机制或“毒损肝络”的分子生物学基础，迄今尚未开展相应的研究。　　肝纤维化是多种慢性肝病发展至肝硬化的过渡阶段，研究发现，缺氧是多种慢性肝病的共同病理特征，在肝细胞损伤区域，局部组织缺氧是主要的病理特点。HIF(hypoxia-inducible factor)是缺氧应激产生特异性应答的转录因子，其功能亚基HIF-1α的表达严格地受氧浓度调节。已探明的HIF-1α下游靶基因达60多种，故该基因被看作组织缺氧的标志，也被称为缺氧应激的“总开关”。“慢性低氧学说”认为，“低氧”是纤维化形成病程中主要的病理特点，HIF-1α在肝纤维的病理过程中，发挥重要的调节作用。本课题组在前期研究的基础上，提出肝纤维化的关键病机是“毒损肝络”，是启动并维持慢性肝损伤，并最终导致肝纤维化的“罪魁祸首”，并针对性提出“益气通络解毒”防治肝纤维化的治法和方药。通过前期的一系列基础和临床研究，初步证实该理论的可靠性。我们认为，“毒损肝络”理论与肝窦“缺氧应激损伤”有许多共通之处，基于HIF-1α介导的肝窦缺氧应激损伤学说，有望从生理病理和分子生物学角度阐释肝纤维化“毒损肝络”的机制。　　研究目的：　　1.临床研究基于数据挖掘技术研究姚乃礼主任医师辨治慢性肝病的经验。　　2.实验研究　　①基于HIF-1α介导的肝窦缺氧应激损伤，探讨肝纤维化“毒损肝络”中医病机的分子生物学机制;　　②基于HIF-1α介导的肝窦缺氧应激损伤，探讨芪术方防治肝纤维化的作用机制。　　研究方法：　　1.临床研究　　检索中国中医科学院广安门医院电子病历系统中经姚乃礼教授治疗的慢性肝病病例，建立“慢性肝炎”和“肝硬化”两个子数据集，应用中医复杂关系分析系统，对每个病种的证候规律、治法规律和用药规律进行分析。　　2.实验研究　　雄性Wistar大鼠，72只，随机分为正常组、模型组、NAC组、芪术组，每组又分3周、6周、9周组。除正常组外，其他各组以CCL4每周2次腹腔注射，制备大鼠肝纤维化模型。于造模同时，正常组、模型组以无菌水灌胃，NAC组以NAC灌胃，芪术组以芪术方灌胃。在造模的第3、6、9周时间点，分别对实验大鼠的一般情况、体重、肝组织病理表现、纤维胶原表达、LN和Co-Ⅳ沉积进行评价，应用RT-PCR技术，检测HIF-1α、VEGF、NDRG2 mRNA表达情况;Western-Blot免疫印迹测VEGF、VEGFR2等蛋白表达情况。　　研究结果：　　1.临床研究　　“肝脾不和”证是导师辨治慢性肝炎和肝硬化最常见的证候类型，“调和肝脾”是最常用的治法;导师治疗慢性肝炎的核心处方主要有以下药物组成:当归、赤芍、白芍、太子参（或党参）、炒白术、茯苓、茵陈、黄连、白豆蔻、白花蛇舌草、法半夏、丹参、莪术、甘草等;治疗肝硬化的核心处方主要由以下药物组成:黄芪、太子参、炒白术、茯苓、当归、赤芍、白芍、丹参、莪术、鳖甲、牡蛎、茵陈、柴胡、甘草等。　　2.实验研究　　①一般情况:各造模组大鼠均出现不同程度的活动度减退，毛色无泽，精神萎顿，进食减少，双目无神，大便稀等表现，肝脏充血明显，质地变硬，边缘变钝，颜色转暗。芪术组上述指标均相对较轻。　　②体重:CCL4慢性肝损伤能够明显抑制大鼠生长（9周后，正常组体重增加值为244±20g，与各模型组相比，P＜0.05)，芪术方能够有效预防CCL4导致的大鼠生长迟缓（9周后，芪术组体重平均增加值为135±12g，与模型组和NAC组相比，P＜0.05)。　　③HE染色:模型组大鼠肝细胞炎症、变性、坏死及纤维组织增生程度较为明显，芪术方及NAC干预后，大鼠肝细胞炎症、变性、坏死及纤维组织增生程度有不同程度减轻，随着造模时间的延长，差异越来越明显。　　④Masson染色:模型组大鼠肝组织胶原纤维沉积最为明显，芪术组和NAC组较模型组明显减少。　　⑤免疫组化:模型组大鼠肝组织LN、Col-ⅣV沉积明显增多(LN、Col-Ⅳ平均光密度值高于正常组，P＜0.05);芪术组大鼠肝组织LN、Col-Ⅳ明显减少(LN、Col-Ⅳ平均光密度值低于正常组,P＜0.05);芪术组在实验第6周，LN平均光密度值低于NAC组(P＜0.05)，在实验第9周，Col-Ⅳ平均光密度值低于NAC组(P＜0.05)。　　⑥RT-PCR:模型组大鼠肝组织HIF-1α、VEGF、NDRG2mR NA水平显著升高（与正常组比，P＜0.05），芪术组和NAC组与模型组比，上述各基因mRNA水平均有不同程度下调。实验第3周，芪术组HIF-1α mRNA下调明显(0.20±0.08)，与模型组、NAC组相比(P＜0.05); VEGF mRNA较低(0.72±0.35)，与模型组、NAC组相比(P＜0.05); NDRG2 mRNA表达水平(0.62±0.27)低于模型组(P＜0.05)，高于NAC组(P＜0.05)。实验第6周，模型组、芪术组、NAC组HIF-1α mRNA水平，差异无统计学意义(P＞0.05);芪术组(0.33±0.02)、NAC组(0.44±0.22) VEGF mRNA低于模型组(P＜0.05)，芪术组与NAC组差异无统计学意义(P＞0.05);芪术组NDRG2mRNA水平(0.80±0.48)与模型组(1.04±0.29)差异无统计学意义(P＞0.05)，与NAC组(0.15±0.13)差异有统计学意义(P＜0.05)。实验第9周，模型组HIF-1α mRNA(1.56±1.25)高于芪术组(0.81±0.34)和NAC组(1.25±0.45)，差异无统计学意义(P＞0.05);模型组VEGFmRNA水平(1.07±1.03)高于NAC组(0.38±0.20，P＜0.05)，与芪术组(1.09±0.33)差异无统计学意义(P＞0.05)。　　⑦Western-Blot:模型组VEGF、VEGFR2蛋白表达水平，较其他各组均升高。实验第3、6、9周，模型组VEGF蛋白表达水平(0.49±0.11、0.74±0.16、0.54±0.13)高于正常组、NAC组和芪术组(P＜0.05)，芪术组和NAC组差异无统计学意义(P＞0.05)。实验第3、6、9周，模型组VEGFR2蛋白表达水平(0.52±0.11、0.89±0.15、0.59±0.13)高于正常组、NAC组和芪术组(P＜0.05)，芪术组和NAC组差异无统计学意义(P＞0.05)。　　结论：　　1.临床研究　　根据疾病的核心病机，确立基本治法和核心处方，在此基础上开展辨病论治与辨证论治相结合，是导师辨治慢性肝病的基本思路。　　2.实验研究　　①HIF-1α可通过调控其下游基因VEGF、NDRG2、VEGFR2高表达，促进肝脏炎症反应、增加肝组织纤维胶原和细胞外基质沉积，介导的肝窦缺氧应激损伤，参与肝纤维化的病理过程;　　②HIF-1α可能是“毒损肝络”的启动基因，VEGF、VEGFR2、NDRG2是在HIF-1α介导下参与络脉损伤病理过程的关键基因，可能是肝纤维化“毒损肝络”中医病机重要的分子生物学基础;　　③芪术方可通过下调HIF-1α及其下游基因VEGF、VEGFR2、NDRG2的表达，减少肝脏纤维胶原和细胞外基质沉积，增强肝窦内皮细胞抗缺氧应激损伤和（或）促进肝窦内皮细胞修复、重建，阻断肝窦毛细血管化进程。