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合浦珠母贝(Pinctada martensii)是我国广西、海南、广东沿海主要的海水珍珠养殖贝类,采珠后产生大量的珍珠贝肉,珍珠贝肉含有丰富的活性物质。本文以合浦珠母贝肉为原料,通过酶解技术及超滤、凝胶层析、反相高效液相色谱等分离纯化技术制备具有抗氧化活性的合浦珠母贝肉寡肽,为合理、高值利用合浦珠母贝肉提供理论依据。以总抗氧化活性、DPPH自由基清除率、超氧阴离子清除率和羟自由基清除率为指标,在Alcalase 2.4 L、枯草杆菌蛋白酶、菠萝蛋白酶、木瓜蛋白酶及风味蛋白酶五种蛋白酶适宜条件下水解合浦珠母贝肉,选择出最佳单酶。在此基础上运用响应面法优化最佳单酶的水解工艺,研究pH值、温度、酶底比(E/S)和水解时间对水解度与抗氧化活性的影响,建立水解度与抗氧化活性的数学模型。最后引用超声波辅助酶解技术再次优化贝肉水解工艺,以提高水解效率。结果表明,Alcalase蛋白酶水解产物具有较强的抗氧化能力,通过综合比较分析将其作单酶;响应面优化得到超声波辅助酶解的最佳水解工艺条件为:底物浓度(料水比W/V)为3:2(W/V),pH7.0,加酶量3.01%(W/W),61℃,超声波频率35 kHz、超声功率360 W处理1 h后,继续酶解0.5 h。在此条件下产物的水解度为33.8 %, DPPH自由基清除率达到67.3 %,平均肽链长度3.2,IC50为15.6 mg/mL。超声波辅助酶解可以大大提高水解率,缩短水解时间。采用超滤、凝胶层析以及反相高效液相色谱进行合浦珠母贝肉抗氧化活性寡肽的分离纯化,并采用基质辅助激光解吸离子化质谱测定和分析了抗氧化寡肽的分子量及其氨基酸序列。结果表明采用超滤进行膜分离的最佳条件为:操作压力3.5 bar,超滤温度5℃。经Sephadex G-25分离得到分子量分布范围为891437.5 Da的PMO,进一步经RP-HPLC纯化,通过MALDI-TOF-MS分析RP-HPLC分离各组分表明:RP-HPLC分离所得a组分分子量为1022.543 Da,b组分分子量为1334.660 Da,其氨基酸序列为:Arg-Gly-Glu-Arg-Arg-Asp-Gly-Tyr-Asn-Gly-Arg,c组分分子量为1494.761 Da,其氨基酸序列为:Val-Ala-Thr-Gly-Leu-Arg-Lys-Glu-Gly-Val-Val-Gly-Gly-Pro-Arg,d组分分子量为1085.597 Da,e组分分子量为1288.819 Da和1304.828 Da,所对应的氨基酸序列分别为: Asn-Ala-Asp-Pro-Ala-Val-Arg-Pro-Ala-Pro-Pro-Lys-Gly ,Ala-Ala-Ala-Ser-Pro-Ser-Gly-His-Ala-Ala-Ser-Pro-Pro-Ala-Asn。最后对膜分离各段产物的DPPH自由基清除能力、超氧阴离子清除能力及羟自由基清除能力进行了比较,同时选择还原型GSH和Vc做PMO抗氧化活性对照,结果表明,膜分离产物中,PMO对三种自由基清除能力最强,DPPH自由基清除能力IC50值为11.1 mg/mL,超氧阴离子清除能力IC50值为18.9 mg/mL,羟自由基清除能力IC50值为26.1 mg/mL;5.23 mg/mL的PMO总抗氧化能力强于0.1%的Vc和1 mg/mL的还原型GSH。