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柑橘的采后病害会导致巨大的经济损失,以往控制柑橘采后病害的主要手段是使用化学杀菌剂,但长期大量使用化学杀菌剂会导致柑橘致病菌产生抗药性,从而降低防治效果,同时也会对人体健康及环境造成危害,因此,迫切需要生产一些新的、高效无毒的生物保鲜剂,以逐步取代化学杀菌剂在采后柑橘上的使用。 本研究旨在筛选出适合34-9酵母菌株(Kloeckera apiculata)发酵生产的培养基配方、摸索34-9酵母菌株的发酵工艺条件、研究在应用推广柑橘贮藏试验中,34-9酵母对柑橘防腐保鲜的效果。主要结果如下: 1.筛选出发酵生产的最佳培养基配方:在摇瓶水平上,对培养基配方进行了单因子试验,筛选出最佳的碳源和氮源;分别对不同金属离子和维生素的用量进行了正交试验,找出适合34-9酵母生长的金属离子和维生素及其最佳配比;对碳源、氮源、磷源和酵母浸膏的主要用量进行了正交试验,找出最佳配比。得出适合34-9酵母菌发酵生产的最佳培养基配方为:葡萄糖30g/L,(NH4)2SO4 2g/L,KH2PO4 5g/L,MgSO4·7H2O 2.4g/L,ZnSO4·7H2O 2g/L,CaCl2·2H2O 0.12g/L,NaCl 0.24g/L,FeSO4·7H2O 0.01g/L,生物素0.5mg/L,泛酸钙6mg/L,硫胺素6mg/L,核黄素3mg/L,蛋白胨15g/L,酵母浸膏10g/L。 2.获得了34-9菌株的最佳摇瓶培养条件:对摇瓶装量、发酵时间、初始pH值和接种量进行了正交试验,找出了他们的最佳组合;对摇床转速、培养温度两个参数的研究发现:在一定的时间内,摇床转速越高,34-9酵母的生物量就明显增高:34-9酵母适宜的发酵温度为30℃。 3.优化了发酵生产工艺:在发酵罐水平上,进行了分批发酵、间歇分批发酵和连续补料发酵的对比试验,优化选择了34-9酵母菌的发酵生产工艺。在连续补料发酵实验中,34-9的发酵菌液浓度达到5×109CFU/mL,湿重达到100g/L。 4.研究了酵母菌34-9防腐保鲜柑橘的效果:在柑橘产地,研究了108CFU/mL的34-9生防菌剂悬浮液对尾张(Citrus.unshiu Marc cv.Owari)、“国庆一号”(Citrus.unshiu Marc cv.Guoqin No.1)、桠柑(Citrus reticulate Blanco cv.Ponkan)和纽荷尔脐橙(Citrus sinensis Osbeck cv.Newhall navel orange)果实防腐保鲜的效果。与保鲜袋配合使用,贮藏90天后,108CFU/mL的34-9酵母菌控制柑橘的腐烂率在5%以下,其防腐效果与低剂量的化学药剂(如施保克、多菌灵)防腐效果相当;控制柑橘的失重率在3%左右,与目前所使用的保鲜剂2,4-D保鲜效果相当。