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研究背景:帕金森病(Parkinsons disease,PD)是一种慢性进行性发展的神经变性疾病,病因不明,缺乏有效的治疗方法,多重复杂致病因素导致黑质多巴胺能细胞水平的损害是其基本的病理生理过程。因此,在PD的临床前阶段应用神经保护治疗延缓或阻止黑质纹状体多巴胺神经细胞的变性及在疾病的进展或晚期阶段应用能营养修复或替代变性的多巴胺能神经细胞的治疗如细胞移植治疗等成为最有临床应用潜力的治疗手段,如何评价这些方法的临床效果并使之从实验室过渡到临床应用,其至关重要的环节和瓶颈是缺乏理想的更接近于临床慢性发病过程和临床特点的PD模型和全面系统性的评价方法,而对于一个新的药物或一项新的治疗技术在进入临床应用之前用非人灵长类模型进行研究和评价是一个重要的过程。
目的:本研究旨在以非人灵长类动物(食蟹猴)为目标载体,建立较为全面的运动行为评价体系,并研究不同年龄段正常食蟹猴的运动行为特点并分析在老化的过程中运动行为的变化及其与脑内黑质纹状体多巴胺能神经系统功能的相关关系,进而建立稳定有效的系统性PD模型。
方法:利用建立的运动行为评价系统,具体包括用于临床评分的视频录像系统;用于定量检测一定时间段内总体随意运动活动总量的计算机化的网络摄像头视频运动监测系统(Webcam monitoring system)及用于测定上肢粗大和精细运动时间的自动运动测定仪(Modified Automated Movement Assessment Panel,MAP)分析食蟹猴不同年龄段(4岁、10岁和15岁)运动行为变化的特点,用可反应纹状体多巴胺能神经系统功能的在体多巴胺转运体放射性同位素配体99mTc-TRODAT-1单光子发射计算机体层扫描(SPECT)方法探测纹状体内年龄相关的纹状体多巴胺转运体特异性摄取率的变化。选用中年食蟹猴(9~15岁),用小剂量神经毒素1—甲基—4苯基—1,2,3,6四氢吡啶(MPTP)0.2mg/kg静脉注射每天1次,以出现明显的PD临床症状为注射终点,并用上述方法长期动态评价制模过程及稳定期临床症状和运动功能的变化趋势、多巴胺系统的完整性及对左旋多巴干预治疗的反应性从而建立稳定的帕金森病系统性模型。
结果:通过研究建立了运动行为评价体系包括运动行为分析的硬件设施、运动行为评价模式、评价程序和标准化操作规程并通过实验证实随着食蟹猴年龄的增长运动行为功能逐渐减退,纹状体多巴胺转运体数量逐渐较少,且运动功能的减退与纹状体多巴胺转运体的减少呈显著统计学意义的线性相关关系。食蟹猴给予MPTP静脉注射后12.0±1.67天,即当临床评分达到10分,随意运动活动总量减少>80%时出现了PD临床症状,在18.8±2.9天达到稳定状态,几乎出现了所有典型的PD临床症状包括静止性震颤,肌强直、运动徐缓和姿势步态不稳等。模型动物经5—6个月临床评分和随意运动活动总量的观察分析显示模型处于稳定的状态或缓慢进行发展的趋势,只有个别动物出现了自发性恢复,SPECT检测证实多巴胺转运体数量的较之造模前明显减少。左旋多巴干预后,临床症状呈现显著的、不同程度的改善。
结论:本研究建立了一套无创性的、实用的、全面客观的食蟹猴运动行为评价体系;联合应用此运动行为评价方法结合在体99mTc-TRODAT-1 SPECT成像技术,一方面进一步证实了年龄相关的运动行为的减低可能是由纹状体多巴胺神经系统的功能减退所致的假说,另一方面建立了稳定的更接近于PD临床特点的系统性MPTP模型,为今后进行帕金森病发病机制研究及神经保护和细胞移植治疗策略的临床前评价奠定了基础。