【摘 要】
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目的将选择性COX-2(Cyclooxygenase-2,环氧化酶-2)抑制剂CLX(Celecoxib,塞来昔布)联合EGFR-TKI(Epidermal Growth Factor Receptor-Tyrosine Kinase Inhibitor,表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂)厄洛替尼作用于肺腺癌细胞株(HCC827)荷瘤裸鼠模型,检测肿瘤细胞内增殖相关因子:PCNA(Prolifer
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目的将选择性COX-2(Cyclooxygenase-2,环氧化酶-2)抑制剂CLX(Celecoxib,塞来昔布)联合EGFR-TKI(Epidermal Growth Factor Receptor-Tyrosine Kinase Inhibitor,表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂)厄洛替尼作用于肺腺癌细胞株(HCC827)荷瘤裸鼠模型,检测肿瘤细胞内增殖相关因子:PCNA(Proliferating Cell Nuclear Antigen,增殖细胞核抗原),COX-2,EGFR(Epidermal Growth Factor Receptor,表皮生长因子受体),免疫调节相关因子:TGF-β(Transforming Growth Factor-β,转化生长因子-β),血清IL-6(Interleukin-6,白介素-6),血清IL-8(Interleukin-8,白介素-8),探究二者药物联合对肺癌细胞增殖,免疫方面的影响及机制。方法(1)将外购达标的24只(HCC827)荷瘤裸鼠模型随机分为4组,分别为:对照组,CLX组,厄洛替尼组,塞来昔布+厄洛替尼组(联合组),每组给与不同的处理方式,具体分别为:对照组:经胃灌注1%tween80溶液;CLX组:经胃灌注等量CLX溶液;厄洛替尼组:经胃灌注等量厄洛替尼溶液;联合组:经胃灌注CLX溶液和厄洛替尼溶液,持续进行17天。(2)给药期间密切观察各组裸鼠的一般状况,如进食量,活动量、色泽及反应性等指标,每隔1天测量荷瘤裸鼠瘤径,第17天将荷瘤裸鼠处死,完整剥离瘤体,测瘤径和重量,计算离体移植瘤体积、抑瘤率。(3)用免疫组化法测各组荷瘤裸鼠模型内增殖相关因子:PCNA、COX-2、EGFR蛋白的表达含量。(4).用ELISA法测各组肺腺癌HCC827裸鼠移植瘤血清中免疫因子IL-6,IL-8的表达含量,免疫组化法测细胞中免疫因子TGF-β的表达含量。(5)统计学方法:应用SPSS 25.0软件进行统计分析,计量资料采用均数±标准差(`x±s)表示,两组样本均数比较行t检验;多组样本间均数比较应用Oneway Anova法(单因素方差分析法),认为P<0.05差异具有统计学意义。结果(1)依据测量结果和计算得出:CLX组、厄洛替尼组、联合组的瘤体抑瘤率分别为:33.18%、71.61%、94.20%,瘤重抑瘤率分别为34.78%、67.63%、91.93%。结果表明CLX组、厄洛替尼组、联合组的抑瘤率都大于对照组,差异有统计学意义(P﹤0.05),此外两个单药组的抑瘤率明显低于联合组,差异有统计学意义(P﹤0.05)。(2)免疫相关表达结果(ELISA+免疫组化法):CLX组血清IL-6,IL-8表达含量较对照组减低,差异有统计学意义(P<0.05);CLX+厄洛替尼组血清IL-6,IL-8表达含量低于对照组、CLX组与厄洛替尼组,差异有统计学意义(P<0.05)。免疫因子TGF-β于胞浆呈棕黄色阳性表达。CLX+厄洛替尼组中的TGF-β阳性表达,均显著低于其在对照组、CLX组及厄洛替尼组中的阳性表达,差异均有统计学意义(P<0.05)。(3)增殖相关表达结果(免疫组化法):HCC827肺癌细胞内PCNA呈褐黄色阳性表达(胞核内),COX-2呈褐黄色阳性表达(胞浆内),EGFR于呈褐黄色阳性表达(胞核、胞浆内)。对照组内PCNA、COX-2的阳性表达比CLX组的阳性表达强度高,差异有统计学意义(P<0.05)。联合组中PCNA、COX-2、EGFR的阳性表达均显著低于其余3组,差别具有统计学意义(P<0.05)。结论(1)本动物实验表明CLX联合厄洛替尼可减弱细胞增殖因子COX-2、EGFR、PCNA的表达,抑制肺肿瘤细胞的生长增殖。(2)CLX联合厄洛替尼可下调细胞因子IL-6,IL-8,TGF-β的表达,发挥免疫调节功能,可能也参与抗肿瘤作用。(3)选择性COX-2抑制剂联合EGFR-TKI能够增强抗肺肿瘤作用,有望成为一类辅助性抗肿瘤药物。
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