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为深入地了解小型猪复合麻醉剂(XFM)全麻作用机制,为临床用药提供理论依据,本试验利用细胞学及分子生物学技术,从神经细胞Ca2+(第二信使)、CaM及细胞膜钙离子通道着手,分析XFM及赛拉嗪引起Ca2+浓度、CaM表达及钙离子通道变化的原因,明确Ca2+、CaM在XFM及赛拉嗪麻醉中的作用,探讨XFM及赛拉嗪麻醉的分子机制。114只健康成年SD大鼠,随机分成空白对照组(B组)、生理盐水对照组(C组)、赛拉嗪组(X组)和XFM麻醉组(H组);除B组外,C、H、X组分为6个亚组,每组6只:麻醉诱导期(I期)、翻正反射消失(II期)、翻正反射消失后15min(III期)、翻正反射消失后35min(IV期)、翻正反射恢复(V期)、恢复直线爬行(VI期)。各组大鼠在对应的时间点断头处死,分离大脑皮层、小脑、丘脑和海马,并提取各脑组织总蛋白质,用免疫印迹法检测各脑组织样品CaM表达量。36只健康成年SD大鼠,随机分成对照组(C组)、氯化钾组(KCl组)、XFM麻醉组(H组)、赛拉嗪组(X组),其中H组和X组又分别分成高剂量组和低剂量组两个亚组,每组6只。无菌条件下将大鼠断颈处死,小心分离脑组织,制作脑神经细胞的悬液,1M KCl刺激后分别加入高低剂量XFM、赛拉嗪作用后,加入钙离子荧光探针fluo-3/AM进行负载,利用流式细胞仪测定细胞内钙离子荧光强度。分别取脑细胞悬液,1M KCl刺激后分别加入Nifedipine阻断L-型钙离子通道、ω-conotoxin GVIA阻断N-型钙离子通道、ω-agatoxin IVA阻断P/Q-型钙离子通道,分别加入XFM、赛拉嗪作用后测细胞内钙离子荧光强度,研究XFM及噻拉嗪对大鼠神经细胞膜钙离子通道的影响,试验结果表明:1.XFM及赛拉嗪明显促进大鼠大脑皮层、小脑、丘脑及海马CaM的表达,在IV期CaM的表达量达到最高;XFM诱导的CaM表达量高于赛拉嗪。2.在高钾刺激神经细胞后使用低剂量和高剂量赛拉嗪,都进一步使神经细胞[Ca2+]i不同程度的增加,而且呈剂量依赖性;在高钾刺激神经细胞后使用低剂量和高剂量XFM,也都进一步使神经细胞[Ca2+]i增加,但是无剂量相关性。3.XFM及赛拉嗪主要作用于L-型钙离子通道,促进钙离子内流。通过结果分析得到以下结论:XFM及赛拉嗪均引起了上述四个脑区CaM表达增加,提示CaM在XFM及赛拉嗪全麻作用的分子机制中可能发挥了一定的作用;XFM及赛拉嗪通过抑制钙移除机制和作用于L-型钙离子通道的双重作用,引起细胞内Ca2+积聚,提示Ca2+可能是XFM及赛拉嗪全麻作用的靶位之一。