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目的:胃癌是我国发病率、死亡率第二高的癌症。大量研究发现miRNA通过调控其靶基因的表达,可能是胃癌发生发展的重要机制之一。本课题在前期研究发现至真方可改善消化道肿瘤多药耐药的基础上,从其介导miR-30a靶向调控COX-2基因的角度,进一步探讨至真方对人胃癌细胞侵袭迁移能力的影响及作用机制。方法:（1）构建COX-2基因3’UTR区荧光素酶报告质粒,用双荧光素酶报告基因法（Duel-Luciferase）验证miR-30a可与COX-2基因3’UTR靶向结合,并抑制其荧光活性;（2）用Real-time PCR、Western blot法检测miR-30a对COX-2mRNA及蛋白水平的表达影响;（3）Transwell实验观察miR-30a对人胃癌细胞侵袭迁移的影响;（4）CCK-8法检测至真方醇提物对人胃癌细胞MKN45的48h抑制率;（5）Transwell实验观察至真方对人胃癌细胞侵袭迁移的影响;（6）用Real-time PCR、Western blot法检测至真方对miR-30a及COX-2 mRNA、蛋白水平的表达影响。结果:1、在293T细胞中,转染miR-30a模拟物组与miR-67（阴性对照）组相比,COX-2基因3’UTR的荧光活性降低（P<0.01）,提示miR-30a可与COX-2基因的3’UTR区靶向结合。在人胃癌细胞中,转染miR-30a、miR-30d、miR-30e模拟物后,分别与miR-67（阴性对照）组相比,COX-2基因3’UTR的荧光活性均降低（P<0.01）;共转染miR-30a/d/e模拟物组与miR-67组相比,COX-2的荧光活性亦降低（P<0.01）;miR-30a组COX-2的荧光活性高于miR-30a/d/e组（P<0.01）。2、在人胃癌细胞中,转染miR-30a模拟物组与miR-67（阴性对照）组相比,COX-2 mRNA及蛋白表达水平下降（P<0.05）;共转染miR-30a/d/e模拟物组与miR-67组相比,COX-2 mRNA及蛋白表达水平亦降低（P<0.01）;miR-30a组COX-2的蛋白表达水平高于miR-30a/d/e组（P<0.01）。转染miR-30a inhibitor组与miR-67组相比,COX-2 mRNA及蛋白表达水平升高（P<0.05）,共转染miR-30a/d/e inhibitor组与miR-67组相比,COX-2 mRNA及蛋白表达水平亦升高（P<0.01）;miR-30a inhibitor组COX-2的蛋白表达水平低于miR-30a/d/e inhibitor组（P<0.01）3、在人胃癌细胞中,转染miR-30a模拟物组与miR-67（阴性对照）组相比,细胞侵袭迁移数减少（P<0.01）;共转染miR-30a/d/e模拟物组与miR-67组相比,细胞侵袭迁移数亦减少（P<0.01）,miR-30a组细胞侵袭迁移数高于miR-30a/d/e组（P<0.01）。而miR-30a inhibitor组与miR-67组相比,细胞侵袭迁移数增加（P<0.01）;共转染miR-30a/d/e inhibitor组与miR-67组相比,细胞侵袭迁移数亦增加（P<0.01）;miR-30a inhibitor组细胞侵袭迁移数低于miR-30a/d/e inhibitor组（P<0.01）。4、至真方醇提物对人胃癌细胞MKN45有明显的增殖抑制作用,48h的IC50、IC20、IC10分别是301.97μg/mL、120.79μg/mL、60.39μg/mL。5、分别用低、中、高（60、120、300μg/mL）浓度的至真方干预胃癌MKN45细胞48h后,与空白对照组（No treatment）相比,细胞的侵袭迁移细胞数减少（P<0.01）,并在一定范围内呈剂量依赖性。6、分别用低、中、高（60、120、300μg/mL）浓度的至真方干预胃癌MKN45细胞48h后,与空白对照组（No treatment）相比,细胞中miR-30a的表达上调（P<0.01）,COX-2 mRNA及蛋白水平的表达量下降（P<0.05）,并在一定范围内呈剂量依赖性。总结:1、miR-30a可靶向调控COX-2的表达,抑制人胃癌细胞的侵袭与迁移。2、至真方可抑制人胃癌细胞的侵袭与迁移,其机制可能与介导miR-30a靶向调控COX-2的表达有关。