DADS诱导MDCC-MSB-1细胞发生G2/M期阻滞机制的研究

来源 :湖南农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:roseisdead
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目的:探讨大蒜提取物二烯丙基二硫化物(DADS)诱导由鸡马立克氏病毒(MDV)引起的淋巴组织增生性肿瘤细胞系MDCC-MSB-1细胞增殖抑制的机制,从细胞通路方向研究DADS对MDCC-MSB-1细胞的阻滞机制,可以为预防马立克氏病引起肿瘤的发生提供科学依据,同时为加快新型药物的开发提供科学依据。方法:本研究以MDCC-MSB-1细胞为试验对象,建立空白对照组和药物组,不同浓度梯度药物DADS(50μmol/L、100μmol/L、150μmol/L)作用细胞24 h,初步探讨DADS诱导MDCC-MSB-1细胞发生G2/M期阻滞机制。(1)DADS对MDCC-MSB-1细胞形态的影响:OLYMPUS荧光显微镜下观察。(2)DADS对诱导MDCC-MSB-1细胞发生G2/M期阻滞的影响:细胞周期检测试剂盒检测。(3)DADS对MDCC-MSB-1细胞G2/M期阻滞机制中相关蛋白的影响:Western Blot检测CDK1、CyclinB1、WEE1、MYT1、P53和P21的蛋白表达。结果:(1)观察DADS作用细胞24 h后,细胞形态从浑圆透亮细胞核明显到细胞膜界限模糊胞内细胞器细胞核碎裂有明显变化,且药物浓度越高,变化越明显。(2)用50μmol/L、100μmol/L、150μmol/L浓度的DADS作用细胞24 h后,MDCC-MSB-1细胞的增殖在G2/M期明显受阻,随着药物浓度的增加,抑制作用更明显,呈药物浓度依赖性趋势。(3)检测DADS作用细胞24 h后的细胞通路阻滞相关蛋白的表达如下:与未添加药物的对照组相比,CDK1蛋白表达增加,CyclinB1蛋白表达下调,P53蛋白表达上调,WEE1和MYT1蛋白表达均上调,三个药物浓度的P21蛋白表与无药物组对比被下调,但三个药物组之间的表达差异性小。结论:DADS对MDCC-MSB-1细胞形态具有一定的影响;二烯丙基二硫化物(DADS)可以诱导由MDV引起的淋巴组织增生性肿瘤细胞系MDCC-MSB-1细胞发生G2/M期增殖阻滞;其阻滞机制是通过调节WEE1/MYT1/CDK1/CyclinB1通路和P53/CDK1/CyclinB1通路中相关蛋白表达来使细胞增殖阻滞在G2/M期。
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