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目的: 1.研究大鼠妊娠与分娩对肛提肌中结蛋白(Desmin)与抗肌营养不良蛋白(Dystrophin)的分布及其基因表达量的影响。 2.研究大鼠妊娠与分娩对盆底肌细胞骨架的影响。 3.探讨妊娠与分娩在盆底功能障碍性疾病(pelvic floor dysfunction,PFD)发病机制中的作用。 方法: 1.研究对象由河北医科大学实验动物中心提供雌性成年未生产过的Wistar大鼠45只,体重180~220g。雄性成年Wistar大鼠10只,体重220~250g。其中随机选取15只雌性成年未生产过的Wistar大鼠为对照组,其余30只雌性成年未生产过的Wistar大鼠使其受孕并分娩,分为阴道分娩组,产后6天组。 2.取材将各组大鼠在麻醉状态下,暴露肛提肌,迅速取肛提肌组织约100mg。分为两块,生理盐水洗净,用滤纸吸干,一块置于冻存管,立即置-80℃低温冻存,用于实时荧光定量PCR测定;另1块置入体积分数为4%多聚甲醛溶液中固定24h,常规脱水、石蜡包埋备用。 3.采用HE染色及免疫组织化学方法观察各组肛提肌形态的变化及Desmin和Dystrophin分布变化。 4.采用实时荧光定量PCR检测各组肛提肌中Desmin和Dystrophin基因表达量的变化。结果资料采用均数±标准差((x)±S)表示,采用SPSS16.0统计软件进行统计学处理,以P<0.05认为差异有统计学意义。 结果: 1.HE染色结果:HE染色镜下观察各组肛提肌切片,其中对照组肛提肌组织均由彼此紧密相连的肌纤维构成,为均染的粉红色,每个肌纤维周边有多个细胞核,紧靠肌膜内表面,肌束间含有胶原纤维、成纤维细胞,血管及神经等结构,肌纤维无变性坏死表现;而阴道分娩组肛提肌肌纤维较对照组肥大,排列相对稀疏,略微紊乱,可见少部分肌细胞横截面积大小不一、有萎缩和肥大细胞,局部可见到肌纤维核中心移位、存在散在坏死肌纤维等;产后6天组肛提肌肌纤维排列较紧密,肌纤维无变性坏死表现。 2.免疫组化染色结果:免疫组化Desmin阳性反应位于肌纤维胞浆内,而Dystrophin阳性反应则位于肌纤维胞膜。阴道分娩组Desmin的表达与非妊娠组和产后6天组相比明显减少,差异具有统计学意义(P<0.05),而Desmin的表达在非妊娠组和产后6天组之间无显著差异;阴道分娩组Dystrophin的表达较非妊娠组和产后6天组减少,差异具有统计学意义(P<0.05),非妊娠组和产后6天组之间无显著差异。 3.荧光实时定量PCR结果:阴道分娩组Desmin mRNA表达量较非妊娠组、产后6天组明显降低,差异均有统计学意义,P<0.05,产后6天组Desmin mRNA表达量与非妊娠组差异无统计学意义;阴道分娩组Dystrophin mRNA表达量较非妊娠组、产后6天组下降,差异均有统计学意义,P<0.05,而非妊娠组与产后6天组差异无统计学意义。 结论: 1.在大鼠妊娠分娩期盆底肌纤维形态发生改变,并引起Desmin、Dystrophin表达减少,在产后盆底肌纤维发生再生,Desmin、Dystrophin合成增加。 2.盆底肌细胞骨架改变是对妊娠与分娩的适应性反应。 3.妊娠与分娩在盆底功能障碍性疾病(pelvic floor dysfunction,PFD)的发病机制中有一定的作用。妊娠与分娩期大鼠盆底肌中Desmin和dystrophin减少可能是盆底功能障碍性疾病的发病因素。