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急性播散性脑脊髓炎、多发性硬化是较常见的中枢神经脱髓鞘疾病,目前认为它们是CD4+T淋巴细胞介导的以炎性脱髓鞘为特征的一类自身免疫性疾病。实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)是研究该病的理想动物模型。在疾病恢复过程中,淋巴细胞以凋亡的方式被清除,从而终止了对神经系统的免疫攻击。糖皮质激素被公认为对EAE有治疗作用,其治疗与促进T细胞凋亡有关。但这类药有抑制正常免疫、水钠潴留等副作用,一定程度上限制了其临床使用。以前的实验已证实黄芩苷可通过抑制NF-kB的活性,减少细胞因子的产生而对感染性脑水肿起保护作用。那么,黄芩苷对EAE有否保护作用呢?目前国内外鲜见报道。如果实验能够证实黄芩苷对EAE有保护作用,则可望成为一种理想的治疗EAE的新药。
一.大鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎模型制备
目的:建立大鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)模型,并讨论模型制作中的有关问题。
方法:健康6~8周龄Wistar大鼠30只随机分为①空白对照组(CON,n=8);②完全福氏佐剂组(CFA,n=10);③EAE组(n=12),采用四足垫皮内注射豚鼠全脊髓匀浆(GPSPH)和自制完全福氏佐剂(CFA,含灭活卡介苗6 mg/mL)混合乳剂,诱导Wistar大鼠EAE模型。动物免疫抗原后,每天予以神经功能评分,称体重,观察发病日期。免疫后14 d处死动物,取大鼠脑干、脊髓(腰膨大处)组织,常规病理切片、HE染色、免疫组织化学法检测白质髓鞘碱性蛋白(MBP)抗原。
结论:本方法制作Wistar大鼠:EAE模型成功,该模型价格相对低廉、成功率高、易于制作,可重复性强。
二. 黄芩苷对大鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎的保护作用及其机制探讨
目的:观察黄芩苷对大鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎的保护作用和黄芩苷对EAE大鼠CNS浸润的炎性细胞凋亡的影响来探讨其保护作用的可能机制。
方法:健康6~8周Wistar大鼠42只随机分为4组:①空白对照组(CON,n=8);②实验性自身免疫性脑脊髓炎组(EAE,n=12);③地塞米松治疗组(DXM:n=l2);④黄芩苷治疗组(BAC,n=lO)。DXM组在抗原免疫后1周予以地塞米松2mg/(kg.d)×7d,腹腔注射;BAC组在抗原免疫后1周予以黄芩苷溶液200mg/(kg.d)×7d,腹腔注射;EAE组和CON组每日以同体积的生理盐水腹腔注射。分别观察各组动物临床发病率、前后体重比、神经功能评分等,大鼠免疫14d后处死,取脊髓(腰膨大处)行石蜡包埋、病理切片,比较各组:HE染色的病灶数,免疫组织化学检测MBP,以及用TUNEL法检测细胞凋亡。
结论:黄芩苷对EAE大鼠有一定的保护作用,其机制可能与促进CNS浸润细胞的凋亡有关。