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牛传染性鼻气管炎病毒(Bovine Infectious Rhinotracheitis Virus,IBRV)又称为是BoHV-1,是牛传染性鼻气管炎(Bovine Infectious Rhinotracheitis,IBR)的病原体,也是引起牛呼吸道疾病的重要病毒性病原之一。BoHV-1感染除引起呼吸道炎症外,还可引起结膜炎、流产和神经症状等。此外,BoHV-1具有三叉神经节潜伏感染周期性激活的特点,导致牛传染病鼻气管炎(IBR)清除难度较大,影响养殖业发展。目前国内传统的商品化疫苗具有潜在的风险,所以研制出新型疫苗及抗体诊断制剂,对IBR的防治具有积极的意义。本研究对BoHV-1 Barthanu/67株进行超速离心浓缩作为免疫原,腹腔免疫6-8周龄的BALB/c小鼠,采用间接免疫荧光方法筛选获得2株单克隆抗体并制备腹水,分别命名为3C1和4F3。亚类鉴定2株单抗重链分别为IgGl和IgA,轻链均为kappa链;间接免疫荧光方法测定上清及腹水效价,单抗3C1效价分别为1:40和1:12 800,单抗4F3效价分别为1:40和1:3200;经间接免疫荧光和Western blot验证,3C1能与gD蛋白发生特异性结合,且与BRV、BVDB和PRV均不发生交叉反应,具有良好的特异性;3C1抗体在MDBK细胞进行BoHV-1感染的中和活性测试,计算得其中和效价为1:1409。利用制备的gD蛋白单克隆抗体,对gD蛋白线性表位进行了抗原表位的鉴定。构建截短的gD重组蛋白,最后截断的蛋白采用上下游引物退火连接到表达载体转染至大肠杆菌感受态中进行蛋白表达,采用Western blot试验分析,以定义3C1识别的表位。显示3C1识别gD蛋白的APRVTVYVD(aa23-31)。分别从N、C端进行截短鉴定VTVYVD(aa26-31)片段为识别的最小氨基酸序列。在这项研究中鉴定的表位在15株经典疱疹病毒中高度保守。综上所述,本研究成功制备出两株抗体,一株具有中和活性的抗BoHV-1 gD蛋白MAb,鉴定出gD蛋白的表位。BoHV-1的gD蛋白能够在细胞中产生中和作用对感染BoHV-1的细胞产生保护性免疫应答。所以制备具有中和活性的抗体并在gD上定位表位将有助于深入了解蛋白结构阐明BoHV-1的致病机理,为开发与该病毒相关的各种疾病的替代疫苗及抗体治疗及诊断技术提供重要依据。