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恶性黑色素瘤是恶性程度最高的皮肤恶性肿瘤。近年来,针对恶性黑色素瘤的研究取得的诸多进展中,PD1/PD-L1通路的研究较为引人关注。PD1（programmed death protein 1,细胞程序性死亡受体1）是T细胞表面的负性免疫检测点。与肿瘤细胞表面的PD-L1（Programmed death-ligand 1,细胞程序性死亡配体1）结合后可抑制T细胞活性,使肿瘤细胞发生免疫逃逸。有研究发现,恶性黑色素瘤的发生发展与PD-L1的高表达存在明显相关性,且PD-L1可以作为独立危险因素评估恶性黑色素瘤患者的预后。目前已用于临床的PD1单抗药物的作用原理是通过阻断PD1与PD-L1的结合达到抗肿瘤的目的。然而肿瘤细胞表面的PD-L1表达调控机制仍有待进一步研究。如果能发现调控PD-L1表达的关键分子,或许会为治疗黑色素瘤提供新的思路。在本课题组的前期研究中,发现RGS1是调控黑色素瘤发生发展的重要分子,它可通过抑制Gαi和Gαs影响G蛋白耦联受体的活性,进而调控和影响下游分子通路。根据经典细胞通路的查询和文献追踪,这些通路有可能影响PD-L1分子的表达。本课题研究中,我们首先通过搜集的黑色素瘤的临床病理切片,对来源于同一样本的两张切片分别进行抗RGS1染色和抗PD-L1染色,发现在黑色素瘤细胞中RGS1的高表达与PD-L1的高表达具有显著的相关性（P<0.05）。接着我们选取了A375人黑色素瘤细胞,通过基因过表达和敲低技术,主动干预了RGS1的表达水平,发现RGS1被调高或调低之后,黑色素瘤细胞中的PD-L1的表达也会出现对应的升高或降低。提示在恶性黑色素瘤细胞中,RGS1的表达与PD-L1的表达存在正相关性,且RGS1表达的变化可能对PD-L1的表达产生影响。本研究最后一部分实验选取了MAPK通路、PI3K/Akt通路、NF-κB信号通路、P53信号通路和JAK-STAT通路五条与肿瘤发生发展密切相关的细胞信号通路。通过免疫印迹法测定当RGS1表达上调后,这些通路的关键信号分子是否发生变化。通过实验研究发现,Erk、磷酸化Erk及磷酸化Akt在RGS1过表达组中表达升高。分别加入对应抑制剂后,该组的PD-L1的蛋白表达也分别出现一定程度的下降。提示RGS1的上调可能引起了Erk,p-Erk及p-Akt表达的升高,进而升高了PD-L1的表达水平。据上述结果推测,在人黑色素瘤细胞中RGS1有可能通过MAPK通路和PI3K/Akt通路调节PD-L1分子的表达。第一部分RGS1与PD-L1在恶性黑色素瘤中的表达相关性研究目的:研究恶性黑色素瘤标本中RGS1与PD-L1的表达是否存在相关性。方法:本实验选取了34组黑色素瘤临床样本,对每组标本的病理切片分别行抗RGS1和抗PD-L1免疫组化染色。分析在黑色素瘤细胞中,两种分子的表达是否具有相关性。结果:分别以色素痣的RGS1和PD-L1的免疫组化染色深度作为基准,将34例黑色素瘤临床样本染色分组。发现PD-L1与RGS1在人黑色素瘤细胞中的表达具有正相关性（P<0.01）。结论:在恶性黑色素瘤临床标本中,RGS1与PD-L1的表达存在明显的正相关性,结果有统计学意义。第二部分恶性黑色素瘤细胞中RGS1对PD-L1表达的影响及相关性研究目的:研究人黑色素瘤细胞中RGS1对PD-L1表达的影响及二者的相关性。方法:选取A375（人体黑色素瘤）细胞,构建RGS1过表达组、RGS1敲低组和对照组,分别测定各组细胞中PD-L1的转录和表达水平。分析RGS1对PD-L1是否具有调控作用。结果:RGS1敲低组的PD-L1蛋白表达量出现明显降低;而RGS1过表达组的PD-L1蛋白表达量及m RNA表达量较对照组均出现明显增高。说明PD-L1的表达会随RGS1的表达的变化而产生变化。结论:在恶性黑色素瘤细胞中,RGS1表达与PD-L1的表达存在正相关性,且RGS1表达的变化可能对PD-L1的表达产生影响。第三部分恶性黑色素瘤细胞中RGS1对PD-L1表达的调控及分子机制的探究目的:研究RGS1在人黑色素瘤细胞中对PD-L1可能存在的表达调控作用,并对其分子机制进行初步探究。方法:用免疫印迹法（Western Blot）分别测定RGS1过表达组及对照组中,五条与肿瘤发生发展密切相关的细胞信号通路中关键分子（MAPK通路的Erk分子,PI3K/Akt通路的Akt分子,NF-κB信号通路的NF-κB P65分子,P53信号通路的P53蛋白分子,以及JAK-STAT通路的STAT1和STAT3分子）的蛋白表达水平。找到可被RGS1正向调控的分子后,加入对应分子的抑制剂,测定PD-L1的表达是否发生变化。结果:与对照组相比较,发现RGS1过表达组中Erk,p-Erk和p-Akt的表达水平升高。分别加入对应抑制剂后,PD-L1的表达出现不同程度的下降。结论:RGS1的上调可引起Erk,p-Erk及p-Akt表达的升高,进而影响PD-L1的表达水平。提示RGS1有可能通过MAPK通路和PI3k/Akt通路对PD-L1的表达进行调控。