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最近的研究表明，MAGE-1基因在肝癌中的表达率较高，可作为肝癌主动免疫治疗的攻击靶点。而其他MAGE基因在肝癌中的表达文献中报道很少，明确其他基因在肝癌中的表达有助于更多的患者接受这种免疫治疗。MAGE基因家族成员同源性很高，目前的检测方法主要是RT-PCR、测序及Southern blot等，其检测方法在特异性及简便性上均有待提高。 本研究利用分子生物学技术在肝癌细胞系中扩增到了MAGE-1编码区全长cDNA，MAGE-6基因片段及一个新的MAGE家族基因。这个新的MAGE家族基因暂命名为MAGE-n。首先，经RT-PCR及测序的方法证实了MAGE-n基因的存在；然后，用原位杂交技术分析了肝癌组织、肝正常组织及其它非肿瘤组织中MAGE—n基因的表达情况；最后，预测了其可能的HLA-A2、A24抗原表位，为MAGE-n基因在肝癌发病机理中的作用研究及肿瘤免疫治疗的应用奠定基础。 一、RT-PCR的方法克隆MAGE-n基因 用RT-PCR的方法扩增肝癌细胞系HHCC中MAGE-1编码区全长cDNA，RT-PCR产物经克隆测序证实，其中有3个基因的表达：1．MAGE-1编码区全长，与GenBank序列一致，未发现点突；2．MAGE-6基因片断；3．及一个新的MAGE家族基因，该基因不与任何已报道MAGE家族基因相同，但与MAGE-A家族基因有同源性，与MAGE-3的同源性最高，为 第四军医大学博士学住论文93％，命名为 MAGE－n（novel and to be known）。利用该序列重新设计特异引物，用RT－PCR的方法重新扩增HHCC中的MAGE－n序列，测序后证实为MAGE－n的序列。在5个肝癌细胞系中，利用RT－PCR的方法检测到2个细胞系表达MAGE－n，进一步证实了MAGE－n的存在。 二、用原位杂交的方法检测肝癌等组织中MAGE呗的表达 用BLAST软件，对MAGE－n基因进行同源性分析后，设计两个寡核昔酸探针，用原位杂交的方法检测肝细胞肝癌组织50例、正常肝组织5例、肝硬化组织 7例及组织芯片中 10例肿瘤组织和非肿瘤组织中 MAGE－n表达。结果发现，10％（5／50）的肝细胞肝癌中；检测到有 MAGE呗的表达，在正常肝组织、肝硬化组织及其它非肿瘤组织中未检测到MAGE－n的表达。MAGE－n的这种表达模式，与其他MAGE基因相同，提示其可作为肝癌免疫治疗的靶分子。 三、MAGE－n基因编码蛋白与HLA－AZ、A24分子结合抗原表位预测 利用计算机软件对MAGE－n基因编码蛋白进行HLA．AZ、A24结合的抗原表位进行预测。结果显示，MAGE－n 蛋白内除含有3 个己发表的HLA－AZ、A24抗原表位外，另外有多个抗原表位与HLA．A”0201、A24分于可能有较高结合活性，这些抗原表位都可用作肽疫苗的研制。