第一部分、 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳加内标法定量分析泪液蛋白　　 目的：许多眼部疾病伴有泪液蛋白的改变，定量分析泪液蛋白对我们进一步了解这些眼部疾病起非常重要的作用。但由于只能从患者获得微量的样本，泪液蛋白的定量分析仍然是一个复杂的技术难题。本研究的目的是建立SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)加内标定量分析微量泪液样本中泪液蛋白的标准方法。　　 方法：用泪液分泌试验滤纸采集同一正常志愿者泪液。在15％ SDS-PAGE的凝胶上，用大豆胰蛋白酶抑制剂(SBTI)作外标蛋白或内标蛋白，结合光密度法分析，计算泪液总蛋白和泪液蛋白的主要成分。同时，用Bradford方法对泪液总蛋白进行了测定。　　 结果：SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳加内标法测得的泪液总蛋白浓度为12.03±0.45 mg/ml，与用Bradford方法测得的结果一致(P＞0.05)。该方法能同时测定8个主要泪液蛋白条带的含量，它们的含量分别为：2.26±0.07(18.8％)，0.10±0.01(0.8％)，0.63±0.13(5.3％)，0.52±0.07(4.3％)，1.14±0.18(9.5％)，1.33±0.21(11.1％)，2.76±0.16(23.0％)，2.95±0.13 mg/ml(24.5％)，与用SBTI作外标蛋白测得的结果无显著差异。　　 结论：成功建立SDS-PAGE加内标定量分析泪液蛋白的方法。以SBTI为内标蛋白，应用SDS-PAGE结合光密度分析的方法，只需要微量的样本，就可以同时测定泪液总蛋白浓度及泪液中主要蛋白的含量。　　 第二部分、 SDS-PAGE加内标法定量分析泪液蛋白的初步应用　　 目的：应用SDS-PAGE加内标定量分析泪液蛋白的方法比较：毛细管与Schirmer试验滤纸两种采集泪液方法的差异；老年人与正常青年人泪液蛋白的差异。　　 方法：用毛细管和泪液分泌试验滤纸采集正常青年人和老年人的泪液。在15％SDS-PAGE的凝胶上，用SBTI作内标蛋白，结合图像分析，计算正常青年人和老年人的泪液总蛋白和泪液蛋白的主要成分。　　 结果：比较两种采集泪液的方法表明，滤纸采样可导致第2条泪液蛋白条带(对应为血清白蛋白)含量增加，而另外5个主要泪液蛋白条带的含量降低。青年人较老年人的泪液总蛋白含量高(P＜0.05)，且蛋白条带分析显示青年人泪液中的各个主要蛋白成分都较老年人的高。　　 结论：应用SDS-PAGE加内标法，只需要微量的样本，就能准确定量分析不同采样方法、不同年龄组的泪液蛋白之间存在的差异。该方法有望成为伴有泪液蛋白改变的疾病的诊断工具。　　 第三部分、过敏性结膜炎患者泪液蛋白的定量分析及sPLA2-Ⅱa的变化　　 目的：过敏性结膜炎患者常伴有泪膜的稳定性下降，而泪液蛋白和泪液中的脂质层在维持泪膜的稳定性上起非常重要的作用。本研究应用SDS-PAGE加内标法定量分析季节性和常年性过敏性结膜炎患者与正常对照组之间泪液蛋白的差异。同时探讨季节性和常年性过敏性结膜炎患者泪液中脂质代谢相关蛋白Ⅱ A型分泌型磷脂酶A2(sPLA2-Ⅱa)有无变化。　　 方法：对季节性和常年性过敏性结膜炎患者和正常志愿者进行问卷调查和常规眼部检查。用泪液分泌试验滤纸采集季节性和常年性过敏性结膜炎患者和正常志愿者的泪液。应用SDS-PAGE加内标法定量分析季节性和常年性过敏性结膜炎患者与正常对照组的泪液蛋白。应用免疫印迹法(Western Blot)的方法，检测季节性和常年性过敏性结膜炎患者和正常志愿者泪液中sPLA2-Ⅱa的含量。　　 结果：季节性和常年性过敏性结膜炎患者的泪膜破裂时间比正常对照组明显缩短。在比较季节性和常年性过敏性结膜炎患者与正常对照组之间泪液蛋白的差异时，由于这两组样本保留了与结膜接触的滤纸部分，其蛋白含量相对较高，电泳后显示出更加多的蛋白条带。我们总共分析了15个蛋白条带的含量，发现季节性和常年性过敏性结膜炎患者泪液的总蛋白浓度升高(P＜0.05)。其中蛋白条带4，6，9的含量在季节性和常年性过敏性结膜炎患者泪液中升高(P＜0.05)。免疫印迹分析表明sPLA2-Ⅱa在季节性和常年性过敏性结膜炎患者泪液中较正常对照组显著升高。　　 结论：季节性和常年性过敏性结膜炎患者泪液的总蛋白含量增加，蛋白构成谱发生了变化。