大鼠骨髓间充质干细胞或单个核细胞诱导内皮细胞的对比研究

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目的:  探究骨髓间充质干细胞或骨髓单个核细胞诱导内皮细胞的对比研究,并进一步观察内皮细胞的生物学特性。  方法:  获取SD大鼠股骨及胫骨骨髓细胞,与培养液混匀后计数,并分两组,A组:将原代骨髓间充质干细胞加入含10%FBS的M199培养液中,接种、传代、纯化至第三代,分检测组:检测骨髓间充质干细胞特性;实验组:在含10%FBS的M199培养液中添加50ng/ml VEGF和10ng/ml bFGF;对照组:加入含10%FBS的M199培养液。B组:应用密度梯度离心法收集单个核细胞,分实验组:在含10%FBS的M199培养液中添加50ng/ml VEGF和10ng/ml bFGF;对照组:加入含10%FBS的M199培养液。分别检测A、B组的①细胞生长形态特征,②应用CCK8试剂盒检测、绘制细胞生长曲线,并计算细胞群体倍增时间;③流式细胞仪检测细胞表面特异性标记物 CD31,CD34和vWF;④免疫组织荧光法检测vWF。  结果:  ①A组培养24小时后可见细胞浓度极大,全为球形的骨髓中的血红细胞,如堆积的沙粒状,悬浮于培养液,多次换液和传代后发现悬浮于培养液中的红细胞大量减少,并见大量的贴壁细胞。B组实验组可见细胞呈梭形、纺锤形和三角形,其中可见少量的圆形、椭圆形细胞排列呈线性。继续培养可见铺路石状生长。  ②B组实验组细胞生长曲线均呈M型,群体倍增时间约为8天(192小时),A、B对照组与A组实验组细胞生长曲线均呈S型,群体倍增时间约为5天(120小时)。  ③B实验组细胞表面特异性标记物 CD31、CD34、vWF均为阳性,而A、B对照组与A组实验组细胞表面特异性标记物 CD31、CD34、vWF均为阴性。  ④B实验组免疫组织荧光染色 vWF阳性,A、B对照组与A组实验组为免疫组织荧光染色vWF阴性。  结论:  SD大鼠骨髓单个核细胞经VEGF和bFGF诱导后可分化为具有血管内皮细胞特征的细胞。但骨髓间充质干细胞添加诱导剂后不能分化为具有血管内皮细胞特征的细胞。
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