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目的：Apelin为G蛋白偶联受体APJ的内源性配体，具有促进血管平滑肌细胞增殖，促进单核细胞向内皮细胞粘附等作用。本实验室前期研究结果发现，apelin-13可以诱导心肌细胞肥大，且PI3K-Akt-ERk1/2-p70S6K信号途径和PI3K-自噬途径均介导了apelin-13诱导的心肌细胞肥大过程。本课题拟研究apelin-13对NOX4的表达及内质网应激的影响，并在前期研究的基础上进一步探讨apelin-13诱导心肌细胞肥大的内质网应激-自噬机制，揭示apelin-13诱导心肌肥厚的新的作用机制，为开发APJ为心血管药物作用靶点提供新的理论依据。方法:1. Western Blot：检测大鼠H9c2心肌细胞APJ, Bip, CHOP, LC3-II/I, beclin-1, p62,NOX4, β-Tubulin的表达；2. SiRNA干扰: APJ shRNA干扰APJ的表达；Bip siRNA干扰Bip的表达；CHOPsiRNA干扰CHOP的表达；3.免疫荧光标记LC3及氯喹阻断自噬体的降解，观察自噬体的形成;或者使用GFP-LC3示踪观察自噬体的形成；4. ER tracker-red荧光标记内质网，观察内质网形态；5. ScepterTM手持式细胞计数器:测量大鼠H9c2心肌细胞直径和体积；6. BCA定量法：测定大鼠H9c2心肌细胞蛋白含量；7. CCK-8试剂盒检测apelin-13对细胞增殖的影响；8. Hoechst33258染色检测apelin-13对心肌细胞凋亡的影响；结果：1. Apelin-13浓度依赖（0-2μM）和时间依赖性（0-24h）促进心肌细胞内NOX4的表达2. Apelin-13浓度依赖（0-2μM）和时间依赖性（0-24h）促进心肌细胞内质网应激标志蛋白Bip和CHOP的表达；3. APJ shRNA抑制apelin-13（1μM）诱导的心肌细胞内质网应激标志蛋白Bip和CHOP的增加；4. Apelin-13诱导原代心肌细胞自噬体的形成，APJ shRNA抑制apelin-13（1μM）诱导的心肌细胞自噬标志蛋白beclin1、LC3-II/I的表达增加；5. NOX4抑制剂DPI阻断apelin-13（1μM）诱导的内质网应激标志蛋白Bip和CHOP的增加；6. NOX4抑制剂DPI阻断apelin-13（1μM）诱导的心肌细胞自噬标志蛋白beclin1、LC3-II/I的表达增加和自噬降解蛋白p62的表达减少；7.内质网应激抑制剂Salubrinal阻断apelin-13诱导的beclin1和LC3-II/I的表达增加及p62的表达降低；内质网应激诱导剂Tunicamycin对apelin-13诱导的beclin1和LC3-II/I及p62表达均无影响;Bip siRNA和CHOP siRNA阻断apelin-13诱导的beclin1和LC3-II/I的表达增加及p62的表达降低；8. Apelin-13促进H9c2心肌细胞中GFP-LC3在内质网上表达，提示可能发生了内质网自噬；9. APJ shRNA抑制apelin-13促大鼠H9c2心肌细胞直径、体积增大和细胞内蛋白含量增加作用；内质网应激抑制剂Salubrinal阻断apelin-13促大鼠H9c2心肌细胞直径、体积增大和细胞内蛋白含量增加作用；内质网诱导剂Tunicamycin增强apelin-13促大鼠H9c2心肌细胞直径、体积增大和细胞内蛋白含量增加作用；自噬抑制剂3MA也可以阻断apelin-13促大鼠H9c2心肌细胞直径、体积增大和细胞内蛋白含量增加作用；Bip siRNA和CHOP siRNA同样具有抑制apelin-13促大鼠H9c2心肌细胞直径、体积增大和细胞内蛋白含量增加的作用；10. Apelin-13浓度依赖性（0-2μM）促进心肌细胞增殖；11. Apelin-13浓度依赖（0-2μM）和时间依赖性（0-24h）增加心肌细胞凋亡；12.内质网应激抑制剂Salubrinal和自噬抑制剂3MA均可阻断apelin-13促大鼠H9c2心肌细胞凋亡作用；Bip siRNA和CHOP siRNA抑制apelin-13促大鼠H9c2心肌细胞凋亡作用。结论：NOX4-内质网应激-自噬途径介导apelin-13促心肌细胞肥大和凋亡调节。