【摘 要】
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实验一 pEGFP-C1质粒的转化、抽提及鉴定 目的:制备可供基因转染所需的增强型绿色荧光蛋白质粒pEGFP-C1。 方法:采用氯化钙法制备E.coli JM109感受态,将pEGFP-C1转化此
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实验一 pEGFP-C1质粒的转化、抽提及鉴定 目的:制备可供基因转染所需的增强型绿色荧光蛋白质粒pEGFP-C1。 方法:采用氯化钙法制备E.coli JM109感受态,将pEGFP-C1转化此感受态菌,经选择性培养基筛选将阳性转化菌落进行扩增。采用碱裂解法小量抽提质粒,经EcoR Ⅰ酶切鉴定为阳性克隆后再扩大培养,用碱裂解法大量抽提,再次酶切鉴定并检测质粒的浓度和纯度。 结果:感受态制备的实验组细菌在含卡那霉素(Kanamycin)的琼脂平板上形成了克隆,而对照组未能形成克隆。抽提的质粒经EcoR Ⅰ酶切后显示一条带,其大小为4.7kb,符合pEGFP-C1的长度。五次质粒大量抽提的pEGFP-C1的A260/A280均在1.8～2.0间,浓度为0.87～1.75μg/μl间。 结论:1.氯化钙法能有效地制备感受态菌,转化pEGFP-C1质粒的E.coli JM109表达Kanamycin抗性基因。2.抽提的质粒经酶切分析证实为pEGFP-C1。3.碱裂解法方法可靠,质量稳定,重复性好,大量抽提的pEGFP-C1浓度和纯度均能满足基因转染的要求。 实验二 羟基磷灰石纳米粒的制备、表面修饰及与DNA的结合 目的:制备经多聚赖氨酸表面修饰的羟基磷灰石纳米粒,研究其与质粒DNA结合的能力。
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