致驴驹腹泻的大肠杆菌分离鉴定及临床治疗

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驴驹腹泻是规模化驴场常见疾病之一,引起该病的原因较为复杂。若治疗措施不当或治疗不及时,将会引起大批量驴驹死亡,对驴场造成的危害极其严重。现阶段,我国主要使用抗生素防治驴驹腹泻,但随着各类抗生素的滥用,造成菌株对抗生素的敏感性降低,临床耐药现象严重。规模化驴场养殖所在区域不同,导致驴驹腹泻的病原菌流行也不相同,抗生素的耐药性也存在差异。因此,在医治腹泻驴驹前,明确发病原因,挑选出敏感药物,制定出合理治疗方案,对兽医临床上治疗驴驹腹泻具有重要的意义。因此本课题通过对齐齐哈尔市某驴场爆发的驴驹腹泻发病原因调查着手,明确一种以体温升高、腹泻和死亡为临床特征的驴驹疾病的病因,为驴驹腹泻性疾病的诊断提供理论基础和技术储备。1.驴驹腹泻病诊断及病因调查2019年11月~2020年3月,齐齐哈尔某驴场突然爆发一起严重的驴驹腹泻。首先对其流行病学调查显示:该驴场共有344头驴,其中幼龄驴(≤4个月)140头,共有74头幼龄驴发病,发病率为21.51%,其中死亡45头幼驴,死亡率为13.08%。随后对腹泻驴驹临诊检查发现:患病驴驹体温升高,精神萎靡,食欲不振,眼结膜粘膜苍白,眼角粘液增多,严重腹泻,排黄色水样粪便,严重者死亡。血常规结果提示机体出现严重的炎症反应。对死亡驴驹剖检发现:皮下组织苍白;腹腔内有红色液体;肝脏组织轻度肿大,质地脆弱;脾脏组织显著增大;肺脏组织显著增大,并见出血点;肾脏组织显著肿大,被膜下斑点状出血;小肠内容物稀薄,表面附有较多粘液。进一步对肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、小肠进行病理组织学检测发现:肝脏组织窦状隙扩张,局部肝细胞变性、坏死;脾脏组织红髓增宽,脾脏生发中心减少或消失;肺泡腔内可见游走吞噬细胞,数量略有增加;肾小管上皮偶见坏死细胞;小肠粘膜固有层内局部肠腺有坏死脱落现象,高倍可见肠腺上皮细胞与基底膜分离,并脱落进入腺腔。最后通过对引起驴驹腹泻的病因检测发现,该病可能并非为寄生虫和病毒感染所致,并在肝脏、肺脏和脾脏等器官中分离得到一株致病菌,对分离的细菌分离培养、纯化、PCR、16S r RNA以及构建系统发育树分析,发现分离菌株在大肠杆菌的分支上,表明该分离菌株为大肠杆菌,并将其命名为CEG-GZL20。2.致驴驹腹泻大肠杆菌致病性回归试验为了验证分离的大肠杆菌CEG-GZL20的致病性,对小鼠腹腔注射CEG-GZL20后,发现小鼠整体表现与患病驴驹相似,感染8~13 h后,死亡率为100%。而E.coli标准株组两组小鼠仅少数表现饮食量减少,精神沉闷,在感染10~14 h后死亡率仅为18.75%。对照组小鼠精神状态良好,且未见死亡。对死亡小鼠进行剖检并无菌采集脏器组织进行病理组织学观察发现:大肠杆菌CEG-GZL20组小鼠组织均表现不同程度的肿大,组织细胞变性坏死。E.coli标准株组小鼠仅有部分组织结构轻微损伤,对照组小鼠组织结构正常。表明分离出的大肠杆菌CEG-GZL20具有较强的致病性。进一步验证分离的致病性大肠杆菌CEG-GZL20是导致驴驹腹泻的病因。将分离到的大肠杆菌CEG-GZL20菌株对驴驹进行临床回归试验,试验结果发现:接菌后,驴驹表现为体温升高,精神沉郁,饮食欲下降,严重腹泻。血常规检测表现为炎性细胞增多,对死亡驴驹进行病理组织学检测发现,肝脏、肺脏、肾脏和脾脏等器官均表现为不同程度的变性、坏死。表明感染大肠杆菌CEG-GZL20是引起此次驴驹腹泻的发病原因。3.大肠杆菌引起驴驹腹泻药敏试验及临床治疗效果评估首先对分离菌株进行药敏试验,结果显示,分离菌株CEG-GZL20呈现多重耐药性,对阿米卡星、头孢菌素、氯霉素、庆大霉素、卡那霉素、林可霉素、甲氧西林、萘啶酸、新霉素、呋喃妥因、多粘菌素、链霉素、磺胺类、四环素、万古霉素均表现耐药;对克林霉素表现低敏感性,对氨苄西林和青霉素表现高度敏感性。最后结合药敏试验结果,选择氨苄西林配合中草药对患病驴驹进行治疗,显著改善了腹泻驴驹的临床症状,且治愈率达72.4%。
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